AMD3100加重apoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变及其可能机制

论文摘要

背景:动脉粥样硬化（atherosclerosis,As）是以内皮损伤或功能障碍为始动环节的慢性炎症反应过程,在此过程中损伤和修复并存。内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPC ）因其可以分化为成熟内皮细胞而发挥着血管内皮损伤后再内皮化作用,且诸多研究显示了其对动脉粥样硬化的保护作用。研究证实,大量趋化因子参与了动脉粥样硬化的病变进程。基质细胞衍生因子1α（stromal cell-derived factor 1 alpha, SDF-1α）与其受体CXCR4的相互作用可以动员骨髓干细胞向内皮损伤处归巢并趋化炎症细胞募集。目的:观察CXCR4阻断剂AMD3100对apoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变的影响,以探讨SDF-1α/CXCR4对动脉粥样硬化的作用及可能机制。方法:36只8周龄雄性apoE-/-小鼠随机分为三组:①普食组（正常饲料喂养）②高脂组（高脂饲料喂养,PBS 0.1ml/2d,腹腔注射）③AMD3100组（高脂饲料喂养,AMD3100 2.5mg / kg/2d,腹腔注射）,其中的高脂饲料为正常饲料加0.25%胆固醇和15%猪油。12周后,所有小鼠经20%乌拉坦0.2～0.3 ml腹腔麻醉,摘除眼球取血,ELISA法测血清SDF-1α水平,采用氧化酶法测定apoE-/-小鼠血清中三酰甘油（triglyceride,TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）含量。苏丹IV染色检测主动脉内膜面动脉粥样硬化病变。石蜡切片HE染色检测apoE-/-小鼠主动脉根部横切面动脉粥样硬化病变。冰冻切片油红O染色检测主动脉窦脂质沉积。免疫组织化学检测小鼠胸主动脉CXCR4和炎症因子TNF-α和NF-κB表达。RT-PCR和Western Blot分别检测小鼠动脉组织TNF-α、动脉和心脏组织NF-κB mRNA和蛋白表达。差速贴壁法结合微孔法分离培养小鼠骨髓细胞,免疫荧光鉴定CD133/VEGFR-2双阳性细胞为EPC; MTT比色法、Transwell迁移法、黏附实验分别检测细胞的增殖、迁移和黏附能力;通过计数典型EPC克隆形成单位和观察次级集落单位的大小及细胞密度检测各组内皮祖细胞的克隆形成能力,RT-PCR和Western Blot检测EPC上CXCR4 mRNA和蛋白表达。结果: AMD3100组小鼠主动脉内膜面和主动脉根部横截面的动脉粥样硬化病变均较高脂组严重,免疫组化和Western Blot法发现AMD3100组小鼠胸腹主动脉炎症因子TNF-α、NF-κB的蛋白表达也增高。血脂检测发现AMD3100处理组apoE-/-小鼠血清TG、TC、HDL–C和LDL-C含量与高脂组均无显著性差异。AMD3100组小鼠外周血SDF-1α水平和动脉壁CXCR4表达低于高脂组。AMD3100组小鼠骨髓源性EPC的增殖、迁移、黏附及克隆形成能力均下降;AMD3100降低了apoE-/-小鼠骨髓EPC上CXCR4 mRNA和蛋白表达水平。结论:①CXCR4阻断剂AMD3100加重apoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变;②CXCR4阻断剂AMD3100上调炎症因子TNF-α和NF-κB表达,减少动脉壁CXCR4表达;③CXCR4阻断剂AMD3100抑制apoE-/-小鼠骨髓源性内皮祖细胞的增殖、迁移、黏附和克隆形成能力,并下调其CXCR4表达。

论文目录

• 一、主要缩略语英文索引
• 二、中文摘要
• 三、ABSTRACT
• 四、正文
• 1. 引言
• 2. 实验材料
• 3. 实验方法
• 4. 实验结果
• 5. 讨论
• 6. 结论
• 7. 创新点及工作设想
• 8. 参考文献
• 五、文献综述
• 六、硕士期间发表、待发表论文
• 七、致谢