盐酸沙拉沙星在凡纳滨对虾体内药动学与消除规律研究

论文摘要

本文建立了盐酸沙拉沙星（Sarafloxacin Hydrochloride）在凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）血淋巴、肝胰腺和肌肉中反相高效液相色谱的检测方法,研究了盐酸沙拉沙星与凡纳滨对虾血淋巴的蛋白结合率,盐酸沙拉沙星单次围心腔注射和单次药饵投喂给药方式下的药动学以及多次药饵投喂给药后的残留消除规律与休药期.主要结果如下：1、盐酸沙拉沙星在凡纳滨对虾血淋巴、肝胰腺和肌肉中的检测方法采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）建立了凡纳滨对虾血淋巴、肝胰腺和肌肉中盐酸沙拉沙星的检测方法。血淋巴、肝胰腺和肌肉样品的处理采用酸化乙腈提取药物,正己烷除脂。色谱仪为Waters2695,色谱柱为KromasiL Eternity S-C18（250×4.6mm）,流动相为乙腈：三氟乙酸（0.1%）=25：75（V/V）,流速为1.2mL/min,柱温为40℃,样品温度为10℃,检测器为荧光检测器（Ex=280nm、Em=460nm）。在该方法下,盐酸沙拉沙星在血淋巴、肝胰腺和肌肉中的平均回收率分别为95.71±0.53%、85.44±4.40%和88.72±2.58%,平均日内精密度（RSD,%）分别为1.38%、3.86%和2.77%,日间精密度（RSD,%）分别为2.53%、4.32%和3.94%。盐酸沙拉沙星在以上三种组织中最低检测限分别为0.001mg/L、0.002mg/kg和0.001mg/kg,定量限分别为0.005mg/L、0.01mg/kg和0.005mg/kg。由此可见该方法准确、可靠、稳定,可以满足凡纳滨对虾血淋巴、肝胰腺和肌肉生物样品中盐酸沙拉沙星含量分析的要求。2、盐酸沙拉沙星与凡纳滨对虾血淋巴的蛋白结合率采用超滤法和RP-HPLC法对盐酸沙拉沙星与凡纳滨对虾血淋巴的蛋白结合率进行测定,通过体内和体外两种方式来研究盐酸沙拉沙星与凡纳滨对虾血淋巴的蛋白结合率。结果表明,盐酸沙拉沙星与凡纳滨对虾血淋巴的蛋白结合率在体内和体外试验中具有相似的规律,即高药物浓度时,蛋白结合率低,低药物浓度时,蛋白结合率高。盐酸沙拉沙星与凡纳滨对虾血淋巴的蛋白结合率在60%-75%左右,表明该药物与凡纳滨对虾血淋巴中的蛋白有较高结合。3、盐酸沙拉沙星在凡纳滨对虾中的药动学特征与生物利用度采用RP-HPLC法,研究在盐度为3.3%,温度为28.0±1.0℃的自然海水养殖下盐酸沙拉沙星单剂量围心腔注射（剂量10mg/kg）和单次药饵投喂（剂量30mg/kg）给药后,盐酸沙拉沙星在凡纳滨对虾体内的药动学。围心腔注射给药后血淋巴中药时曲线较适合用三室模型来拟合,而药饵投喂给药后血淋巴中药时曲线较适合采用二室模型来拟合。采用非房室模型统计矩原理推算出围心腔注射给药下盐酸沙拉沙星在凡纳滨对虾血淋巴、肝胰腺和肌肉中的药动学参数如下：达峰时间（Tmax）分别为0.08h、1h、0.25h,达峰浓度（Cmax）分别为25.824±2,64mg/L、69.844±10.73mg/kg、6.941±0.99mg/kg,曲线下面积（AUCo-∞）分别为73.93mmg·h/L、793.834mg·h/L18.447mg·h/L,消除半衰期（t1/2z）分别为19.4h、64.871h、20.211h,清除率（CLz）分别为0.135L/h/kg、0.013L/h/kg、0.542L/h/kg。采用同样的方法推算出药饵投喂给药下盐酸沙拉沙星在凡纳滨对虾血淋巴、肝胰腺和肌肉中的药动学参数分别如下：Tmax分别为2h、2h、2h,Cmax分别为12.793+2.36mg/L、312.649±45.96mg/kg、6.019+0.73mg/kg,AUCo-∞分别为133.146mg.h/L、2516.513mg·h/L、40.138mg·h/L,t1/2z分别为16.706h、16.363h、30.278h,CLz分别为0.225L/h/kg、0.012L/h/kg、0.747L/h/kg。结果表明该药物在凡纳滨对虾体内吸收迅速,主要分布在肝胰腺,然后在肝胰腺中代谢和消除,在血淋巴和肌肉中分布较少,消除较快。盐酸沙拉沙星在凡纳滨对虾体内的生物利用度（F）为60.05%。4、盐酸沙拉沙星连续药饵投喂凡纳滨对虾的残留消除规律与休药期本试验研究了盐酸沙拉沙星经多剂量药饵投喂凡纳滨对虾后在血淋巴、肝胰腺和肌肉组织中的残留消除规律与休药期。在水温为28.0±1.0℃,盐度为3.3%条件下,盐酸沙拉沙星以30mg/kg的剂量连续给药5d后（给药间隔12h）,分别取凡纳滨对虾血淋巴、肝胰腺和肌肉样品,采用RP-HPLC法测定样品中的药物浓度。结果表明：盐酸沙拉沙星在肝胰腺中的药物残留浓度远高于血淋巴和肌肉,后两者的药物残留浓度比较低而且血淋巴中的残留浓度高于肌肉,盐酸沙拉沙星在血淋巴、肝胰腺和肌肉中的消除半衰期分别为14.74h、12.16h和14.14h。根据我国和欧盟有关氟喹诺酮类药物在动物源性食品中最高残留限量规定,若规定可食用组织中的盐酸沙拉沙星的最低残留限量为0.01mg/kg,在本试验条件下,采用WT1.4软件计算出盐酸沙拉沙星在凡纳滨对虾肝胰腺和肌肉中的休药期分别为307.24h和95.29h。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 药物代谢动力学概述
• 1.1.1 药物代谢动力学研究内容及意义
• 1.1.2 药物体内过程
• 1.1.3 药物代谢动力学模型及相关参数
• 1.1.4 影响药物代谢动力学行为的因素
• 1.1.5 药物浓度的分析方法
• 1.2 盐酸沙拉沙星概述
• 1.2.1 沙拉沙星的抗菌作用机理
• 1.2.2 沙拉沙星的药效学及毒理学研究
• 1.2.3 盐酸沙拉沙星的检测方法
• 1.2.4 盐酸沙拉沙星的药物动力学研究
• 1.2.5 盐酸沙拉沙星的残留研究
• 1.3 休药期
• 1.3.1 休药期的计算
• 1.3.2 制定休药期的意义
• 1.4 研究内容与意义
• 1.4.1 研究内容
• 1.4.2 研究意义
• 第二章 凡纳滨对虾血淋巴、肝胰腺和肌肉中盐酸沙拉沙星含量测定方法
• 2.1 材料和方法
• 2.1.1 试验动物
• 2.1.2 试验药品与试剂
• 2.1.3 试验仪器与设备
• 2.1.4 给药和取样
• 2.1.5 样品前处理
• 2.1.6 色谱条件
• 2.1.7 标准曲线
• 2.1.8 回收率及精密度测定
• 2.1.9 数据处理
• 2.2 结果
• 2.2.1 色谱行为
• 2.2.2 检出限及测定下限
• 2.2.3 标准曲线
• 2.2.4 回收率
• 2.2.5 精密度
• 2.3 讨论
• 2.3.1 样品处理
• 2.3.2 色谱条件
• 第三章 盐酸沙拉沙星与凡纳滨对虾血淋巴的蛋白结合率
• 3.1 试验材料
• 3.1.1 试验动物
• 3.1.2 试验药品和试剂
• 3.1.3 试验仪器和设备
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 体内蛋白结合率试验
• 3.2.2 体外蛋白结合率试验
• 3.2.3 样品分析
• 3.2.4 蛋白结合率计算
• 3.2.5 数据处理
• 3.3 结果
• 3.3.1 盐酸沙拉沙星与凡纳滨对虾体内血浆蛋白结合率
• 3.3.2 盐酸沙拉沙星与凡纳滨对虾体外血浆蛋白结合率
• 3.4 讨论
• 3.4.1 血浆蛋白结合率测定方法
• 3.4.2 盐酸沙拉沙星与凡纳滨对虾血淋巴蛋白结合率
• 第四章 盐酸沙拉沙星在凡纳滨对虾体内的药动学
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 试验动物
• 4.1.2 试验药品和试剂
• 4.1.3 仪器和设备
• 4.1.4 给药和取样
• 4.1.5 样品处理
• 4.1.6 样品中盐酸沙拉沙星分析
• 4.1.7 数据处理
• 4.1.8 生物利用度计算
• 4.2 结果
• 4.2.1 围心腔注射给药的药动学
• 4.2.2 单次药饵投喂给药的药动学
• 4.2.3 盐酸沙拉沙星在纳滨对虾中的生物利用度
• 4.3 讨论
• 4.3.1 盐酸沙拉沙星在凡纳滨对虾体内的房室模型
• 4.3.2 盐酸沙拉沙星在凡纳滨对虾体内的药动学特征
• 4.3.3 盐酸沙拉沙星在凡纳滨对虾体内的生物利用度
• 4.3.4 盐酸沙拉沙星的疗效以及给药方案
• 第五章 盐酸沙拉沙星在凡纳滨对虾中的残留消除规律
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 试验动物
• 5.1.2 试验药品和试剂
• 5.1.3 仪器和设备
• 5.1.4 给药和取样
• 5.1.5 样品处理
• 5.1.6 样品中盐酸沙拉沙星分析
• 5.1.7 数据处理
• 5.2 结果
• 5.2.1 盐酸沙拉沙星在血淋巴和组织中的残留浓度
• 5.2.2 盐酸沙拉沙星在血淋巴和组织中消除曲方程及消除半衰期
• 5.2.3 休药期的计算
• 5.3 讨论
• 5.3.1 盐酸沙拉沙星在凡纳滨体内的残留消除规律
• 5.3.2 盐酸沙拉沙星凡纳滨对虾体内的休药期
• 参考文献
• 致谢