论文摘要
种植体表面改性和基因治疗相结合越来越引起研究者的关注,如何将基因组装到种植体表面成为研究的热点。本研究旨在通过层层静电自组装的方法,将编码绿色荧光蛋白（GFP）基因组装到种植体表面,实现种植体表面的基因引入。根据正负电荷相互吸引的原理,采用层层静电自组装（layer-by-layer assembly,LBL）的方法,将制备好的多孔纯钛片依次浸入带正电荷的聚乙烯亚胺（poly ethylene imine, PEI）溶液、带负电荷的透明质酸（hyaluronic acid, HA）溶液、带正电荷的脂质体/GFP质粒（lipid-DNA complex, LDc）溶液中,即可在钛片表面组装一层基因薄层,表示为：钛片-PEI-（HA/LDc）1将样本重复浸入HA和LDc溶液中,可形成多层基因薄层,从而将编码绿色荧光蛋白的GFP基因组装到多孔纯钛表面。采用X射线光电子能谱（XPS）检测钛片表面元素的组成,未组装的空白对照组钛片检测出Ti、N、O和C元素,组装5层的钛片表面检测不到Ti,出现了Na元素、S元素和P元素,N元素含量升高。采用场发射扫描电子显微镜（FSEM）观察钛片表面形貌,结果显示组装组钛片表面出现球形颗粒,其直径随组装层数增加逐渐增大。透射电镜（TEM）检测显示,组装的质粒可以在磷酸盐缓冲液中释放,释放出的LDc逐渐分离,降解为较松散状,但仍有转录活性。采用接触角测试仪对组装的钛片表面测试,、与对照组相比有较好的润湿性。将前成骨细胞MC3T31-E1接种到组装好的钛片表面,观察24h和72h的绿色荧光蛋白的转染情况,计算转染率,进行细胞毒性（MTT）测试与细胞形态观察。结果显示：组装8层的24h的转染率较其他组高,72h的转染率普遍低于24h的转染率,细胞毒性测试结果显示,细胞毒性随着组装层数增加逐渐增大,但相对于空白对照组都显示了较好的细胞活性和细胞形态。应用LBL技术可以实现多孔纯钛表面GFP基因的组装,该基因薄膜可以在不需外界任何转染剂的条件下,将GFP转染到前成骨细胞中,随着组装层数增加转染率升高,且该表面具有较好的细胞活性。
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