导读:本文包含了小鼠白介素论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:白介素-4,突变体,腺相关病毒,基因治疗
小鼠白介素论文文献综述
田丽春,朱情情,刘艾洁,王青青,黄光瑞[1]（2019）在《携带小鼠白介素-4截短型突变体基因的5型腺相关病毒载体的构建及外源蛋白的体外表达》一文中研究指出目的:制备携带碳端结构域缺失的小鼠白介素-4(Interleukin-4,IL-4)基因突变体的5型重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus, r AAV)并在细胞水平检测其介导的外源蛋白表达情况。方法:通过分子克隆技术构建携带小鼠IL-4碳端22个氨基酸缺失的突变体的表达质粒pSNAV-mIL-4ΔC22,叁质粒共转染法制备重组的5型AAV病毒,体外感染人支气管上皮样细胞系16HBE和BEAS-2B,并通过Western blot和ELISA检测外源蛋白表达。结果:DNA测序表明构建的小鼠IL-4碳端第118位氨基酸位点处截短的突变体基因表达序列正确无误,制备的重组病毒载体r AAV5-mIL-4ΔC22滴度约为3×10~(11)vg/m L。r AAV5-GFP感染16HBE和BEAS-2B细胞后36小时开始可见持续稳定的荧光蛋白表达,重组病毒r AAV5-mIL-4ΔC22感染16HBE和BEAS-2B细胞后外源蛋白在培养上清中呈分泌型表达。结论:本研究成功构建了携带小鼠IL-4碳端结构域缺失型突变体的AAV表达质粒并制备了重组病毒r AAV5-mIL-4ΔC22,该病毒可有效转染16HBE和BEAS-2B细胞并介导外源基因分泌表达截短型小鼠IL-4突变体蛋白。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2019年02期）
童森[2]（2016）在《拮抗高迁移率族蛋白B1对烫伤小鼠白介素-35表达及T细胞免疫功能的影响》一文中研究指出研究背景与目的严重烧伤后易出现免疫功能紊乱,既往研究证实高迁移率族蛋白B1及白介素35在多原因导致的免疫功能紊乱发病机制中起重要作用。高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)是烧伤后重要的晚期炎症介质和经典的损伤相关分子(DAMPs)。HMGB1一方面参与炎性细胞的聚集和组织的修复,另一方面也能激活免疫功能细胞分泌TNF、IL-1和其它促炎因子,并引起血管通透性增加、发热等病理生理反应。此外HMGB1还能促使T细胞亚群分化由Th1向Th2漂移,并可以促进调节性T细胞(Treg)表面分子的成熟。既往研究发现,严重烧伤后主要组织HMGB1表达广泛、增高较晚,且持续时间长。临床资料显示,严重烧伤第1天患者血浆HMGB1含量明显升高,并且其水平与严重脓毒症病理过程密切相关。因此HMGB1在烧创伤、感染、脓毒症等病理生理过程中扮演着重要角色,被认为是烧创伤引起脓毒症的潜在治疗靶点。严重烫伤动物血清中的HMGB1表达水平升高,与脾脏Treg表面标志分子表达上调、免疫抑制功能增强有关。白介素35(IL-35)作为与Treg免疫抑制功能密切相关的新型细胞因子,在Treg的分化和发育中都不可或缺。IL-35由IL.12 α(即p35)和EB13两个亚基构成,在Treg的亚群(iTr35)、调节性B细胞(Breg)、CD8阳性调节性T细胞(CD8+Tregs)、髓源性免疫抑制细胞(MDSC)等免疫细胞表达。Treg可通过IL-35调控Th1、Th2和Th17等效应T细胞的分化,如IL-35可将T细胞中Thl细胞周期阻滞于G1期以抑制Thl增殖,或可通过抑制Th17表面受体表达,抑制Th17功能,从而相对增强Th2的功能。严重烫伤后HMGB1是否会影响效应细胞对IL-35的表达,继而影响T淋巴细胞分化及免疫功能,尚未见文献报道。本实验通过建立小鼠烫伤模型。采用实时荧光定量核酸扩增检测系统(Q-PCR)和酶联免疫吸附测定法(ELISA)等动态检测了小鼠烫伤后72 h内其心、肝、脾、肺组织及脾脏单个核细胞中HMGB1和IL-35的表达以及脾脏淋巴细胞功能的变化。通过腹腔注射HMGB1的特异性拮抗剂Abox拮抗小鼠体内HMGB1的主动分泌和被动释放,进一步检测此条件下,实验小鼠体内各脏器组织IL-35表达变化及脾脏淋巴细胞功能的改变。试图了解小鼠烫伤后HMGB1对其脏器组织IL-35的表达及脾脏淋巴细胞功能变化的影响,为改善严重烧伤后机体免疫抑制状态提供新的思路。目的观察小鼠烫伤后心、肝、脾、肺组织及脾脏单个核细胞中HMGB1和IL-35的表达变化,并探讨HMGB1对脏器组织细胞表达IL-35及脾脏T淋巴细胞免疫功能的影响。方法选择成年、雄性BALB/c小鼠,称重后随机分为：空白组、假伤组、烫伤组、Abox干预组。乙醚吸入性麻醉后常规制作小鼠背部15%TBSA烫伤模型。烫伤组和干预组小鼠烫伤后0、12 h给予补液抗休克。干预组烫伤后2 h和12 h分别给予HMGB1特异性拮抗剂Abox腹腔注射(300 μg/只)。于伤后24、48、72 h取材,留取心、肝、脾、肺等组织,组织匀浆后,分别提取RNA和组织总蛋白；qPCR法测定IL-35亚基p35和EBI3 mRNA表达,ELISA法测定各组织、脾脏单个核细胞中HMGB1和IL-35蛋白表达。另将脾脏组织分离出脾脏单个核细胞,并用贴壁法分离部分脾脏单个核细胞中的T细胞,cck8法检测T细胞增殖活性；并取T细胞上清测定IL-2、IFN-γ、IL-4含量。使用SPSS16.0软件对各组数据进行统计学处理。数据采用均数±标准差(x±s)表示；资料满足正态分布时,采用两独立样本t检验；组间比较采用单因素方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。结果1小鼠烫伤后脏器组织HMGB1及IL-35表达变化正常小鼠(空白组)心、肝、脾、肺组织及脾脏单个核细胞HMGB1蛋白和IL-35亚基(P35及EBI3) mRNA和蛋白表达均有表达。与空白组比较,假伤组肝、脾、肺组织及脾脏单个核细胞HMGB1蛋白表达无差异(P>0.05),而假伤组心脏组织HMGB1蛋白表达高于空白组(P<0.05)；假伤组心、肝、脾组织及脾脏单个核细胞于48 h内P35及EBI3 mRNA水平高于空白组(P<0.05),肺组织P35及EBI3 mRNA无明显差异(P>0.05)；假伤组肝、脾、肺组织及脾脏单个核细胞于72内IL-35蛋白表达与空白组无差异,心脏组织IL-35蛋白表达高于空白组(P<0.05)。与空白组与假伤组比较,烫伤组伤后24、48、72 h小鼠心、肝、脾脏组织中HMGB1蛋白、P35、EBI3 mRNA及IL-35蛋白水平明显升高(P<0.01),而肺脏组织中P35、EBI3 mRNA及IL-35蛋白水平明显下降。2 Abox干预对烫伤小鼠组织HMGB1表达的影响与假伤组与空白组比较,烫伤组各脏器HMGB1表达在烫伤后24h显着上升(P<0.01),并在24-48h维持在高水平,烫伤72h后逐渐下降。与烫伤组比较,Abox干预组伤后24、48 h小鼠心、肝、脾、肺组织HMGB1含量及脾脏单个核细胞HMGB1表达均明显下降(P<0.01)。3 Abox干预对烫伤小鼠体内IL-35表达水平的影响3.1 IL-35 mRNA表达：与假伤组比较,烫伤组小鼠各脏器IL-35亚基p35mRNA表达均明显提高。其中以脾脏变化最明显,肺脏变化最小,在伤后48h、72h,肺脏p35mRNA表达水平与假伤组无差异。亚基EBI3 mRNA表达水平均升高(P<0.05)以肝脏变化最大,肺脏变化最小,在伤后48h与72h组,肺脏EBI3mRNA表达水平与假伤组无差异。使用Abox干预后24h,烫伤小鼠各脏器中IL-35两亚基的表达水平均明显下调(P<0.01)。干预后48h,肺脏两亚基mRNA表达水平差异无统计学意义。3.2 IL-35蛋白水平变化：与假伤组比较,烫伤后24h心脏、肝脏、脾脏组织中IL-35蛋白含量及脾脏单个核细胞IL-35的分泌量均较假伤组升高(P<0.01),以脾脏变化最大。而烫伤后24h肺组织IL-35蛋白表达水平出现下降(P<0.01)。Abox干预后小鼠心脏、肝脏、脾脏组织和脾脏单个核细胞IL-35蛋白水平均明显下降(P<0.01)。肺组织IL-35变化趋势与其它组织相反,Abox干预后其含量明显上升。4 Abox干预对烫伤小鼠脾脏T细胞免疫功能的影响4.1 IFN-y及IL-4分泌水平：与假伤组比较,烫伤组T淋巴细胞分泌的IFN-γ及IL-4含量于伤后24、48 h明显升高(P<0.01),72 h降低至假伤组水平(P>0.05)。与烫伤组比较,Abox干预后,伤后24、48h IFN-γ更明显升高,IL-4明显降低,因此Abox干预组IFN-γ/IL-4比值较烫伤组明显升高(P<0.01)。4.2 T淋巴细胞增殖活性：与假伤组比较,烫伤组的T淋巴细胞增殖活性及其细胞因子IL-2含量显着降低。Abox干预后,T细胞增殖活性,T淋巴细胞增殖活性及其细胞因子IL-2含量较烫伤组显着升高(P<0.01)。结论正常小鼠心、肝、脾、肺组织及脾脏单个核细胞HMGB1蛋白和IL-35亚基(P35及EBI3) mRNA和蛋白表达均有表达。小鼠烫伤后,心、肝、脾组织中IL-35亚基(P35及EBI3) mRNA表达水平及IL-35蛋白水平明显升高,而肺组织中P35及EBI3 mRNA及IL-35蛋白水平明显下降。Abox可有效的降低烫伤小鼠心、肝脏、脾组织及脾脏单个核细胞对HMGB1、P35和EBI3 mRNA及IL-35蛋白的表达；促进脾脏T细胞增殖,以及Th2为主的效应T细胞向Thl为主的转化,增强Thl细胞的功能,从而有助于改善严重烧伤后免疫抑制状态。(本文来源于《南方医科大学》期刊2016-03-17）
宋芳,冯若鹏,赵紫薇,陈晶,贺帅[3]（2015）在《孕酮对反复自然流产小鼠白介素8表达的调节作用》一文中研究指出目的:探讨孕酮对自然流产小鼠母胎界面白介素(IL)-8的调节作用。方法:建立经典的自然流产小鼠模型(CBA/J×DBA/2交配组合),分为两组,孕酮组注射黄体酮,模型组同步注射等量的生理盐水。另设正常妊娠组小鼠(正常组)对照,每组10只小鼠。用免疫组织化学染色法和反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测各组小鼠蜕膜及绒毛组织中IL-8蛋白和mRNA的相对表达情况。结果:孕酮组血清孕酮(84.91±10.05ng/ml)水平明显高于模型组(41.83±9.77ng/ml),而IL-8(615.23±213.62pg/ml)水平明显低于模型组(1653.14±321.25pg/ml),差异均有统计学意义(P<0.01);孕酮组血清孕酮、IL-8水平分别与正常组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学染色和RT-PCR在绒毛组织中,孕酮组IL-8蛋白和mRNA(0.067±0.028,61.28±4.13)相对含量均明显低于模型组(0.135±0.012,85.72±2.63),差异均有统计学意义(P<0.01),与正常组(0.059±0.021,58.33±2.87)比较均无统计学意义(P>0.05);在蜕膜组织中,孕酮组IL-8蛋白和mRNA的相对含量低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05),与正常组比较均无统计学意义(P>0.05)。结论:孕酮可下调自然流产小鼠母胎界面IL-8的表达。(本文来源于《中国计划生育学杂志》期刊2015年03期）
叶育双,宋康,江立斌[4]（2015）在《穿山龙总皂苷对慢性迁延期哮喘小鼠白介素-17A表达的影响》一文中研究指出目的:研究穿山龙总皂苷对抑制慢性迁延期哮喘小鼠气道壁及支气管平滑肌增生,抑制肺泡灌洗液、肺组织匀浆中白介素-17A的表达的影响。方法:清洁级BALB/c小鼠70只随机分为空白对照组、模型对照组、穿山龙总皂苷高剂量组、中剂量组、低剂量组、阳性对照组(醋酸泼尼松组)、穿山龙总皂苷+醋酸泼尼松组。卵蛋白(OVA)致敏激发小鼠制作哮喘小鼠模型,在实验第18~55天,空白对照组、模型对照组以生理盐水灌胃,治疗组穿山龙总皂苷高、中、低剂量组分别每天灌胃给予穿山龙总皂苷80、40、20 mg/kg,阳性对照组给醋酸泼尼松混悬液10 mg/kg,穿山龙总皂苷+醋酸泼尼松组给穿山龙总皂苷40 mg/kg和醋酸泼尼松5 mg/kg。实验结束后HE染色观察哮喘小鼠肺组织病理形态变化,测定气道平滑肌面积和气道内壁面积,ELISA法测定肺泡灌洗液和肺组织匀浆中白介素-17A水平。结果:穿山龙总皂苷能抑制慢性迁延期哮喘小鼠气道壁及支气管平滑肌的增生,抑制其肺泡灌洗液和肺匀浆中白介素-17A表达的水平。与空白对照组比较,模型对照组小鼠气道平滑肌、气道内壁增厚(P<0.01),肺泡灌洗液和肺组织匀浆中IL-17A明显升高(P<0.01);与模型对照组比较,气道平滑肌、气道内壁增厚缓解(P<0.01),低、高、中剂量组IL-17A水平降低(P<0.01);穿山龙治疗组间比较,中、高剂量组比低剂量组对气道平滑肌、气道内壁增厚改善效果明显(P均<0.05),中剂量组对小鼠IL-17A表达的影响更为显着(P<0.01);与阳性对照组比较,穿山龙总皂苷+醋酸泼尼松组对小鼠IL-17A表达影响更为显着(P<0.01)。结论:穿山龙总皂苷能够抑制慢性迁延期哮喘小鼠气道壁及支气管平滑肌的增生,抑制其肺泡灌洗液、肺组织匀浆中白介素-17A的表达,控制哮喘的发生、发展。(本文来源于《中华中医药学刊》期刊2015年01期）
刘清毅,程江涛,张宏华,杨印楼[5]（2014）在《雷公藤甲素对哮喘小鼠白介素8及白介素10表达的影响》一文中研究指出目的研究雷公藤甲素对哮喘小鼠的治疗作用及对白介素8(IL-8)及白介素10(IL-10)表达的影响。方法 60只小鼠,随机分6组,每组各10只。分别为正常对照组(A)、哮喘组(B)、地塞米松治疗组(C)及不同剂量雷公藤甲素治疗组(D、E、F),建立小鼠卵蛋白哮喘模型,用ELISA测定肺组织匀浆及气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-8、IL-10表达水平。结果哮喘组小鼠肺组织匀浆及BALF中IL-8表达均高于正常对照组(P<0.01),哮喘组小鼠肺组织匀浆及BALF中IL-10表达均低于正常对照组(P<0.01),雷公藤甲素治疗组及地塞米松组IL-8低于哮喘组(P<0.01),雷公藤甲素治疗组及地塞米松组IL-10高于哮喘组(P<0.01)。结论雷公藤甲素对哮喘小鼠有明显治疗作用,可抑制IL-8表达及提高IL-10的表达。(本文来源于《辽宁医学杂志》期刊2014年03期）
唐玉红,赵国斌,邵传森[6]（2013）在《小鼠白介素12质粒对哮喘模型CD4~+CD25~+T细胞的影响》一文中研究指出目的研究小鼠白介素12(mIL-12)基因表达质粒对小鼠支气管哮喘模型CD4+CD25+T细胞的影响,并探讨其可能机制。方法卵白蛋白(OVA)致敏建立小鼠哮喘模型。BALB/c小鼠48只,随机分为8组,即哮喘模型组、正常对照组、模型对照组、阳性药对照组、空质粒预防对照组、空质粒治疗对照组、mIL-12质粒预防组和mIL-12质粒治疗组。末次雾化攻击24 h后,测定各组小鼠脾脏、外周血中CD4+CD25+T细胞百分比。结果①哮喘模型组脾脏中CD4+CD25+T细胞比例明显高于正常对照组和模型对照组(P<0.05)。②与哮喘模型组相比,mIL-12质粒预防组和mIL-12质粒治疗组脾脏中CD4+CD25+T细胞百分比则明显下降(P<0.05)。③外周血中CD4+CD25+T细胞百分比各组之间无显着性差异。结论 CD4+CD25+T细胞与哮喘的发病机制密切相关,推测肌注mIL-12质粒可以抑制哮喘的发展,从而使该细胞百分比发生改变。(本文来源于《中国现代医学杂志》期刊2013年33期）
林英豪,叶长虹,熊婧,毕丽红,黎丽旋[7]（2013）在《小鼠白介素-10真核表达载体的构建及表达》一文中研究指出目的构建小鼠白介素-10(murineinterleukin-10,mIL-10)的真核表达载体,并研究其在293T细胞中的表达。方法 RT-PCR扩增小鼠脾脏IL-10基因后,克隆到真核表达载体pcDNA3.0上,酶切和测序鉴定重组质粒的大小、序列。采用脂质体转染法将重组质粒pcDNA3.0-mIL-10瞬时转染293T细胞,用Westernblot法检测IL-10表达。结果重组质粒pcDNA3.0-mIL-10构建成功,而且转染了293T细胞中提取的蛋白可检测到活性蛋白。结论经酶切和测序鉴定重组质粒pcDNA3.0-mIL-10构建成功,并在293T细胞中成功表达活性蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。(本文来源于《现代消化及介入诊疗》期刊2013年03期）
魏衍财,朱晨露,陈艳红,秦伟,田洁[8]（2012）在《小鼠白介素17受体A胞外段的表达、纯化及鉴定》一文中研究指出目的:分别克隆小鼠白介素17受体A胞外段(mIL-17RAaa32-322)及小鼠IgG2AFc(mIgG2AFc)基因,构建mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白原核表达载体,并在体外表达、纯化及鉴定。方法:利用基因重组技术构建pET32a(+)-mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc原核表达载体,并在E.coli Rosetta中表达mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白,经镍离子螯合层析分离纯化后,用SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹法进行鉴定。结果:成功构建pET32a(+)-mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc原核表达载体,获得高效表达的融合蛋白,且蛋白质印迹证实为目的蛋白。结论:获得mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定基础。(本文来源于《江苏大学学报(医学版)》期刊2012年04期）
胡梅,刘群良,谭峰,程莉娟,张波[9]（2012）在《还少丹对D-半乳糖衰老模型小鼠白介素-2及线粒体DNA含量的影响》一文中研究指出目的:探讨还少丹对衰老模型小鼠白介素-2(IL-2)及线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)含量的影响。方法:将40只小鼠随机分成空白对照组、衰老模型组、低剂量药物组和高剂量药物组,每组10只。采用皮下注射D-半乳糖溶液(100 mg/kg)制备亚急性衰老模型,同时用还少丹水煎液灌胃6周。双抗夹心ELISA法测定血清IL-2的含量;分光光度法测定肝、脑组织中mtDNA含量。结果:与空白对照组比较,模型组小鼠血清IL-2含量明显减少,肝和脑组织mtDNA含量明显增高(均P<0.01)。与模型组比较,还少丹低剂量和高剂量组都能提高衰老模型小鼠血清IL-2的含量,降低肝、脑组织mtDNA的含量,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。结论:还少丹能够提高衰老小鼠的机体免疫功能,降低肝、脑组织中mtDNA的含量,从而起到延缓衰老的作用。(本文来源于《国际病理科学与临床杂志》期刊2012年01期）
刘中景,王者令,孙晓慧,柳盛,顾义海[10]（2010）在《加味小柴胡汤对乙肝病毒转基因小鼠白介素-12、白介素-4、干扰素-γ mRNA表达的影响》一文中研究指出目的:通过实验研究观察加味小柴胡汤对HBV转基因小鼠IL-12、IL-4、IFN-γmRNA表达的影响。方法:36只经筛选HBV DNA阳性的转基因小鼠随机分为3组,每组12只,中药组给予加味小柴胡汤水煎剂、西药组给予拉米夫定、空白对照组(简称盐水组)给予生理盐水,观察各组实验动物血清IL-12、IL-4和肝组织中IFN-γmR-NA活性的变化情况。结果:对IL-12、IL-4活性的影响,与盐水组和西药组比较,给药后中药组小鼠血清IL-12明显升高,而IL-4显着降低,差异有显着性意义(P<0.01,P<0.05);而对小鼠肝组织IFN-γmRNA的表达,中药组与盐水组和西药组比较,差异均有显着性意义(P<0.01)。结论:加味小柴胡汤有明显的调节和改善HBV转基因小鼠IL-12、IL-4、IFN-γmRNA活性的作用。(本文来源于《中西医结合肝病杂志》期刊2010年05期）
小鼠白介素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究背景与目的严重烧伤后易出现免疫功能紊乱,既往研究证实高迁移率族蛋白B1及白介素35在多原因导致的免疫功能紊乱发病机制中起重要作用。高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)是烧伤后重要的晚期炎症介质和经典的损伤相关分子(DAMPs)。HMGB1一方面参与炎性细胞的聚集和组织的修复,另一方面也能激活免疫功能细胞分泌TNF、IL-1和其它促炎因子,并引起血管通透性增加、发热等病理生理反应。此外HMGB1还能促使T细胞亚群分化由Th1向Th2漂移,并可以促进调节性T细胞(Treg)表面分子的成熟。既往研究发现,严重烧伤后主要组织HMGB1表达广泛、增高较晚,且持续时间长。临床资料显示,严重烧伤第1天患者血浆HMGB1含量明显升高,并且其水平与严重脓毒症病理过程密切相关。因此HMGB1在烧创伤、感染、脓毒症等病理生理过程中扮演着重要角色,被认为是烧创伤引起脓毒症的潜在治疗靶点。严重烫伤动物血清中的HMGB1表达水平升高,与脾脏Treg表面标志分子表达上调、免疫抑制功能增强有关。白介素35(IL-35)作为与Treg免疫抑制功能密切相关的新型细胞因子,在Treg的分化和发育中都不可或缺。IL-35由IL.12 α(即p35)和EB13两个亚基构成,在Treg的亚群(iTr35)、调节性B细胞(Breg)、CD8阳性调节性T细胞(CD8+Tregs)、髓源性免疫抑制细胞(MDSC)等免疫细胞表达。Treg可通过IL-35调控Th1、Th2和Th17等效应T细胞的分化,如IL-35可将T细胞中Thl细胞周期阻滞于G1期以抑制Thl增殖,或可通过抑制Th17表面受体表达,抑制Th17功能,从而相对增强Th2的功能。严重烫伤后HMGB1是否会影响效应细胞对IL-35的表达,继而影响T淋巴细胞分化及免疫功能,尚未见文献报道。本实验通过建立小鼠烫伤模型。采用实时荧光定量核酸扩增检测系统(Q-PCR)和酶联免疫吸附测定法(ELISA)等动态检测了小鼠烫伤后72 h内其心、肝、脾、肺组织及脾脏单个核细胞中HMGB1和IL-35的表达以及脾脏淋巴细胞功能的变化。通过腹腔注射HMGB1的特异性拮抗剂Abox拮抗小鼠体内HMGB1的主动分泌和被动释放,进一步检测此条件下,实验小鼠体内各脏器组织IL-35表达变化及脾脏淋巴细胞功能的改变。试图了解小鼠烫伤后HMGB1对其脏器组织IL-35的表达及脾脏淋巴细胞功能变化的影响,为改善严重烧伤后机体免疫抑制状态提供新的思路。目的观察小鼠烫伤后心、肝、脾、肺组织及脾脏单个核细胞中HMGB1和IL-35的表达变化,并探讨HMGB1对脏器组织细胞表达IL-35及脾脏T淋巴细胞免疫功能的影响。方法选择成年、雄性BALB/c小鼠,称重后随机分为：空白组、假伤组、烫伤组、Abox干预组。乙醚吸入性麻醉后常规制作小鼠背部15%TBSA烫伤模型。烫伤组和干预组小鼠烫伤后0、12 h给予补液抗休克。干预组烫伤后2 h和12 h分别给予HMGB1特异性拮抗剂Abox腹腔注射(300 μg/只)。于伤后24、48、72 h取材,留取心、肝、脾、肺等组织,组织匀浆后,分别提取RNA和组织总蛋白；qPCR法测定IL-35亚基p35和EBI3 mRNA表达,ELISA法测定各组织、脾脏单个核细胞中HMGB1和IL-35蛋白表达。另将脾脏组织分离出脾脏单个核细胞,并用贴壁法分离部分脾脏单个核细胞中的T细胞,cck8法检测T细胞增殖活性；并取T细胞上清测定IL-2、IFN-γ、IL-4含量。使用SPSS16.0软件对各组数据进行统计学处理。数据采用均数±标准差(x±s)表示；资料满足正态分布时,采用两独立样本t检验；组间比较采用单因素方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。结果1小鼠烫伤后脏器组织HMGB1及IL-35表达变化正常小鼠(空白组)心、肝、脾、肺组织及脾脏单个核细胞HMGB1蛋白和IL-35亚基(P35及EBI3) mRNA和蛋白表达均有表达。与空白组比较,假伤组肝、脾、肺组织及脾脏单个核细胞HMGB1蛋白表达无差异(P>0.05),而假伤组心脏组织HMGB1蛋白表达高于空白组(P<0.05)；假伤组心、肝、脾组织及脾脏单个核细胞于48 h内P35及EBI3 mRNA水平高于空白组(P<0.05),肺组织P35及EBI3 mRNA无明显差异(P>0.05)；假伤组肝、脾、肺组织及脾脏单个核细胞于72内IL-35蛋白表达与空白组无差异,心脏组织IL-35蛋白表达高于空白组(P<0.05)。与空白组与假伤组比较,烫伤组伤后24、48、72 h小鼠心、肝、脾脏组织中HMGB1蛋白、P35、EBI3 mRNA及IL-35蛋白水平明显升高(P<0.01),而肺脏组织中P35、EBI3 mRNA及IL-35蛋白水平明显下降。2 Abox干预对烫伤小鼠组织HMGB1表达的影响与假伤组与空白组比较,烫伤组各脏器HMGB1表达在烫伤后24h显着上升(P<0.01),并在24-48h维持在高水平,烫伤72h后逐渐下降。与烫伤组比较,Abox干预组伤后24、48 h小鼠心、肝、脾、肺组织HMGB1含量及脾脏单个核细胞HMGB1表达均明显下降(P<0.01)。3 Abox干预对烫伤小鼠体内IL-35表达水平的影响3.1 IL-35 mRNA表达：与假伤组比较,烫伤组小鼠各脏器IL-35亚基p35mRNA表达均明显提高。其中以脾脏变化最明显,肺脏变化最小,在伤后48h、72h,肺脏p35mRNA表达水平与假伤组无差异。亚基EBI3 mRNA表达水平均升高(P<0.05)以肝脏变化最大,肺脏变化最小,在伤后48h与72h组,肺脏EBI3mRNA表达水平与假伤组无差异。使用Abox干预后24h,烫伤小鼠各脏器中IL-35两亚基的表达水平均明显下调(P<0.01)。干预后48h,肺脏两亚基mRNA表达水平差异无统计学意义。3.2 IL-35蛋白水平变化：与假伤组比较,烫伤后24h心脏、肝脏、脾脏组织中IL-35蛋白含量及脾脏单个核细胞IL-35的分泌量均较假伤组升高(P<0.01),以脾脏变化最大。而烫伤后24h肺组织IL-35蛋白表达水平出现下降(P<0.01)。Abox干预后小鼠心脏、肝脏、脾脏组织和脾脏单个核细胞IL-35蛋白水平均明显下降(P<0.01)。肺组织IL-35变化趋势与其它组织相反,Abox干预后其含量明显上升。4 Abox干预对烫伤小鼠脾脏T细胞免疫功能的影响4.1 IFN-y及IL-4分泌水平：与假伤组比较,烫伤组T淋巴细胞分泌的IFN-γ及IL-4含量于伤后24、48 h明显升高(P<0.01),72 h降低至假伤组水平(P>0.05)。与烫伤组比较,Abox干预后,伤后24、48h IFN-γ更明显升高,IL-4明显降低,因此Abox干预组IFN-γ/IL-4比值较烫伤组明显升高(P<0.01)。4.2 T淋巴细胞增殖活性：与假伤组比较,烫伤组的T淋巴细胞增殖活性及其细胞因子IL-2含量显着降低。Abox干预后,T细胞增殖活性,T淋巴细胞增殖活性及其细胞因子IL-2含量较烫伤组显着升高(P<0.01)。结论正常小鼠心、肝、脾、肺组织及脾脏单个核细胞HMGB1蛋白和IL-35亚基(P35及EBI3) mRNA和蛋白表达均有表达。小鼠烫伤后,心、肝、脾组织中IL-35亚基(P35及EBI3) mRNA表达水平及IL-35蛋白水平明显升高,而肺组织中P35及EBI3 mRNA及IL-35蛋白水平明显下降。Abox可有效的降低烫伤小鼠心、肝脏、脾组织及脾脏单个核细胞对HMGB1、P35和EBI3 mRNA及IL-35蛋白的表达；促进脾脏T细胞增殖,以及Th2为主的效应T细胞向Thl为主的转化,增强Thl细胞的功能,从而有助于改善严重烧伤后免疫抑制状态。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
小鼠白介素论文参考文献
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