可溶性环氧化物水解酶抑制剂对脂肪细胞脂质代谢及分泌功能的影响

论文摘要

目的：用脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）刺激脂肪细胞,在体外模拟脂肪细胞的炎症状态,观察可溶性环氧化合物水解酶抑制剂（soluble epoxide hydrolase inhibitor, sEHi）—AEPU对脂肪细胞摄取及降解氧化型低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL）的影响及可能的机制；并观察AEPU对脂肪细胞胆固醇流出的影响；同时观察炎症状态下脂肪细胞分泌脂联素（adiponectin, ADP）、肿瘤坏死因子—α（tumor necrosis factor-alpha, TNF-α）的情况；探讨AEPU对脂肪细胞分泌ADP、TNF-α的影响及其可能的机制,进一步阐明脂肪细胞脂质代谢及分泌功能与动脉粥样硬化（atherosclerosis, AS）的关系。通过本研究可能加深对AEPU抗AS的了解,为临床治疗与肥胖相关的代谢性疾病提供新的治疗思路。方法：培养3T3-L1脂肪细胞至促分化成熟,加入100ng/ml的LPS处理24小时后,再分别用不同浓度AEPU（0,1,10,50,100μmol/L）共同孵育24小时,或在加入不同浓度AEPU前1小时加入过氧化物酶增殖体激活型受体γ（peroxisome proliferator activated receptor gamma, PPARγ）拮抗剂GW9662 5μmol/L。用放射配基法测定各组脂肪细胞对125I-ox-LDL的摄取和降解；液体闪烁计数器检测各组脂肪细胞氚标记胆固醇（3H-Cholesterol）的流出率；免疫印迹法（Western Blot）测定脂肪细胞CD36、PPARγ和三磷酸腺苷结合盒转运子A1 （ATP-binding cassette transporter A1, ABCA1）的蛋白表达；实时荧光定量多聚酶链式反应（Realtime-PCR）测定脂肪细胞CD36、PPARγ及ABCA1mRNA的表达；用酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组脂肪细胞培养液中的ADP、TNF-α水平。结果：1.脂肪细胞可以摄取和降解125I-ox-LDL,AEPU干预后脂肪细胞PPARγ和CD36的蛋白及mRNA表达增加,对125I-ox-LDL的摄取与降解增加,并呈剂量依赖性。2.AEPU呈剂量依赖性促进脂肪细胞胆固醇的流出；并且AEPU呈剂量依赖性地增加脂肪细胞ABCA1蛋白及mRNA的表达。3.AEPU呈剂量依赖性地降低炎性脂肪细胞分泌TNF-α的水平,并增加抗炎因子ADP的浓度。结论：1.AEPU能够增强脂肪细胞对ox-LDL的摄取和降解,可能与上调PPARγ-CD36的表达有关。2.AEPU通过PPARγ-ABCA1途径能改善炎性脂肪细胞的胆固醇流出,抑制脂肪细胞内胆固醇过度蓄积。3.LPS可以诱发脂肪细胞的炎症反应,刺激脂肪细胞分泌TNF-α, AEPU能降低脂肪细胞分泌TNF-α,并增加抗炎因子ADP的浓度。AEPU可能通过上调PPARγ的表达来增加ADP水平,这可能是AEPU具有抗炎作用的机制之一。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略语
• 第一章前言
• 第二章 材料与方法
• 1 仪器设备与试剂
• 2 细胞培养
• 3 药物干预
• 4 氧化型低密度脂蛋白的摄取及降解
• 5 胆固醇流出测定
• 6 实时荧光定量多聚酶链式反应
• 7 免疫印迹法（Western Blot）检测
• 8 酶联免疫吸附测定法（ELSIA）检测脂联素（ADP）的水平
• 9 酶联免疫吸附测定法（ELSIA）检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水 平
• 10 统计学分析
• 第三章 结果
• 1 3T3-L1脂肪细胞的培养及鉴定
• 2 氧化型低密度脂蛋白的摄取及降解
• 3 AEPU对apoA-I介导的胆固醇流出的影响
• 4 各组脂肪细胞CD63,ABCA1和PAPγmRNA的表达情况
• 5 AEPU对CD36、PPARγ、ABCA1蛋白表达的影响
• 第四章 分析与讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 攻读学位期间主要研究成果