论文摘要
目的:从卵巢癌细胞株A2780中分离出A2780卵巢癌干细胞,鉴定A2780干细胞表达的特异性标记物CD133+抗原,分析卵巢癌组织中IL-17的来源以及IL-17与卵巢癌干细胞之间的关系,鉴定A2780干细胞表达的IL-17R,观察IL-17在体外对A2780干细胞生长、增殖和成球作用的影响。方法:采用含有EGF、bFGF、BSA和人胰岛素的DMEM/F12无血清培养基从卵巢癌细胞株A2780中分离A2780干细胞,用免疫荧光和流式细胞术对A2780干细胞的CD133+抗原表达进行检测;采用免疫组化对卵巢癌组织切片中的IL-17表达进行检测,用免疫荧光对卵巢癌组织切片的CD4+、CD68+、CD133+抗原以及IL-17阳性细胞表达进行检测;采用PCR和real-time PCR对A2780细胞和A2780干细胞的IL-17R表达进行检测,用免疫荧光和流式细胞术对A2780干细胞的IL-17R和CD133+抗原表达进行检测;采用人重组IL-17体外刺激A2780干细胞,用MTT法检测IL-17对A2780干细胞生长、增殖以及成球能力的影响。结果:从卵巢癌细胞株A2780干细胞中成功地分离出A2780干细胞,在无血清培养基中A2780干细胞呈悬浮生长,具有很强的自我更新能力,CD133+阳性抗原表达率高达90%以上;卵巢癌组织切片中表达内源性的IL-17,CD4+和CD68+细胞能分泌IL-17,卵巢癌组织中同时表达CD133+抗原和内源性的IL-17;与A2780细胞相比较,A2780干细胞表达更多的IL-17R,并且IL-17R和CD133+抗原存在共表达的情况;通过人重组IL-17对A2780干细胞的体外刺激,发现A2780干细胞生长速度加快,干细胞球的数量变多,干细胞球的体积也增大。结论:我们的研究表明,通过无血清诱导培养的方法,能从卵巢癌细胞株中分离出卵巢癌干细胞,CD133+抗原是卵巢癌干细胞的特异性标记物,卵巢癌组织中表达大量的IL-17,CD4+细胞和巨噬细胞能分泌IL-17,卵巢癌干细胞也表达大量的IL-17R,IL-17能促进卵巢癌干细胞的生长、增殖和成球。这为进一步研究肿瘤干细胞以及IL-17对肿瘤干细胞的作用机制奠定了坚实的基础。