论文摘要
目的:基于人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型,研究消痰散结方对人胃癌裸鼠移植瘤血管生成拟态（vasculogenic mimicry,VM）的影响,采用特殊的双重染色方法以及电镜技术对血管生成拟态进行形态学观察,运用免疫组织化学方法检测移植瘤组织中MMP-2（matrix metalloproteinase 2,MMP-2）、MMP-9（matrix metalloproteinase 9,MMP-9）和LN-5γ2（laminin 5 gamma 2 chain,LN-5γ2）蛋白的表达,探讨消痰散结方对血管生成拟态的作用机制。方法:1、BALB/c-nu/nu裸小鼠30只,通过右前肢腋部皮下移植人胃癌MKN-45瘤块建立人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型。2、造模成功后的荷瘤鼠随机分为生理盐水组、消痰散结组和多西环素组,每组10只。于造模48h后开始灌胃给药:生理盐水组,灌生理盐水0.4ml/只,1次/d ;消痰散结组,灌消痰散结方煎剂0.4ml/只,1次/ d ;多西环素组,灌盐酸多西环素溶液0.4ml/只,1次/ d,以上各组均连续灌胃4周。定期观察移植瘤生长情况、荷瘤鼠的体重变化及全身状况等。3、4周后处死荷瘤鼠,采集肿瘤组织,称取瘤重,计算抑瘤率。4、应用免疫组织化学CD34和PAS（periodic acid schiff stain,PAS）特殊双重染色法检测肿瘤组织是否存在VM,计数VM,并用扫描电镜观察VM的形态。5、免疫组织化学方法检测肿瘤组织中MMP-2、MMP-9和LN-5γ2蛋白的表达。结果:1、成功复制人胃癌MKN-45裸鼠皮下移植瘤模型,成瘤率100%。造模后7d左右可在右前肢腋部皮下触及较硬肿块,后肿块逐渐增大,荷瘤裸鼠逐渐出现皮肤干枯、进食减少、消瘦及行动迟缓等衰竭症状。2、消痰散结方对人胃癌MKN-45裸鼠皮下移植瘤生长的影响:多西环素组和消痰散结组的抑瘤率分别为30.0%和43.5%。多西环素组和消痰散结组的平均瘤重都明显低于生理盐水组（P<0.01）,消痰散结组平均瘤重与多西环素组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。3、经CD34和PAS双重染色证实人胃癌MKN-45裸鼠皮下移植瘤中存在由肿瘤细胞围成的PAS染色阳性,CD34染色阴性的腔隙样结构,即为VM。电镜下亦可见到VM的存在。4、消痰散结方对人胃癌MKN-45裸鼠皮下移植瘤VM的影响:多西环素组和消痰散结组中VM数目均明显少于生理盐水组（P<0.01）,多西环素组中VM数目与消痰散结组相比,差异有统计学意义（P<0.01）。5、消痰散结方对人胃癌MKN-45裸鼠皮下移植瘤中MMP-2蛋白表达的影响:多西环素组和消痰散结组中MMP-2免疫组化指数均明显少于生理盐水组（P<0.01）,多西环素组中MMP-2免疫组化指数与消痰散结组相比,差异有统计学意义（P<0.01）。6、消痰散结方对人胃癌MKN-45裸鼠皮下移植瘤中MMP-9蛋白表达的影响:多西环素组和消痰散结组中MMP-9免疫组化指数均明显少于生理盐水组（P<0.01）,多西环素组中MMP-9免疫组化指数与消痰散结组相比,差异有统计学意义（P<0.01）。7、消痰散结方对人胃癌MKN-45裸鼠皮下移植瘤中LN-5γ2蛋白表达的影响:多西环素组和消痰散结组中LN-5γ2免疫组化指数均明显少于生理盐水组（P<0.01）,多西环素组中LN-5γ2免疫组化指数与消痰散结组相比,差异有统计学意义（P<0.01）。结论:1、消痰散结方对人胃癌MKN-45裸鼠皮下移植瘤的生长具有抑制作用;2、人胃癌MKN-45裸鼠皮下移植瘤中存在VM;3、消痰散结方能够抑制人胃癌MKN-45裸鼠皮下移植瘤VM的形成,其机制可能与下调肿瘤组织中MMP-2、MMP-9和LN-5γ2蛋白的表达有关。