宁康霉素产生菌BAC-9912的诱变育种及培养条件的研究

论文摘要

海洋环境独特,其高压、高盐、低营养、低温的特点,被认为是生命活动的极端环境,这种环境造就了微生物种类及代谢途径的特异性,可产生完全不同于陆地微生物的新颖生物活性物质。因此,海洋微生物将是今后获得新的医用、农用抗生素的重要资源。海洋细菌 BAC-9912 是分离自大连渤海流域的一株产生抗真菌活性物质的细菌,通过系统的细菌分类学鉴定和 16SrRNA 序列分析,被定名为地衣芽孢杆菌（Bacilluslicheniformis）。BAC-9912 能够利用常规培养基产生抗菌活性物质,活性很强,是一种有广泛应用前景的广谱抗生素,命名为宁康霉素（Nincomycin）。 本论文通过紫外线和亚硝基胍对宁康霉素产生菌 BAC-9912 诱变和筛选,获得两株高产菌株 9912-7-2U（UV 处理获得）和 9912-2U-32N（NTG 处理获得）,其摇瓶效价分别为 17646.4iu/ml 和 21780.8iu/ml。比出发菌株效价分别提高 126.9%和 180.0%。连续传代摇瓶效价稳定。初步建立了形态观察法、琼脂块大通量法两种初筛模型。 通过单因子和正交试验,优化菌株 9912-7-2U 和 9912-2U-32N 摇瓶发酵条件。确定最佳发酵培养基:葡萄糖 2.5%,酵母膏 1.5%, KH2PO4 0.04%,FeSO40.02%,ZnSO40.01%;最佳发酵条件:接种龄 9912-7-2U 为 14h,9912-2U-32N 为 12h,接种量 5%,初始 pH9912-7-2U 为 6.0,9912-2U-32N 为 7.2,发酵时间 26h,装液量25ml/250ml,培养温度 28℃。应用二剂量法测定 9912-7-2U 和 9912-2U-32N 抗生素的相对效价,分别为 21111.5u/ml 和 23195.6u/ml,较原始发酵培养基和发酵条件（17136.6u/ml 和 18172.4u/ml）分别提高了 23.2%和 27.6%。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 目录
• 第一章 引言
• 1.1 海洋微生物产生抗生素类生物活性物质的研究
• 1.2 农用抗生素育种技术的研究
• 1.3 论文工作的目的
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 菌株的自然分离
• 2.2.2 菌悬液的制备
• 2.2.3 紫外线和亚硝基胍诱变
• 2.2.4 初筛
• 2.2.5 复筛
• 2.2.6 摇瓶发酵
• 2.2.7 抑菌活性的测定
• 2.2.8 效价测定
• 2.2.9 正交试验法进行培养基的优化
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 不同诱变条件的诱变效果
• 3.2 紫外线诱变剂量与致死率的关系
• 3.3 致死率与正变率之间的关系
• 3.4 紫外线对9912－7 菌株突变株产素的变势
• 3.5 诱变后高产菌株的初筛
• 3.6 高产菌株的复筛
• 3.7 高产菌株摇瓶发酵和遗传稳定性实验
• 3.8 海洋地衣芽孢杆菌 BAC-9912-U2G 和BAC-9912-U2G-32N 的培养基和培养条件的优化
• 3.9 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢