论文摘要
人PTPRO是受体型酪氨酸磷酸酯酶家族的一员,其功能主要涉及肾脏肾小球细胞的结构和功能,神经组织中轴突的生长和导向,以及肿瘤抑制。与其功能相对应,PTPRO主要表达于不同发育时期的肾脏组织和神经组织,而在很多肿瘤细胞中则通过DNA甲基化沉默。例如,在肾脏中,PTPRO表达于发育早期的肾小球细胞顶部和发育成熟的肾小球足细胞顶部;在脑中,PTPRO最高表达出现于妊娠中后期,这一时期也是脑部轴突发生的主要时期;由高甲基化介导的PTPRO的沉默常见于不同的肿瘤和肿瘤细胞系中。尽管存在表达差异,但是我们对PTPRO表达的调控机制了解很少。我们详细地研究了PTPRO表达调控的机制。首先,我们发现PTPRO是一个新的E2F1的靶基因。过表达E2F1能上调PTPRO的mRNA水平并且激活PTPRO启动子荧光素酶报告基因活性;PTPRO启动子上存在两个E2F1的结合位点;EMSA和ChIP实验表明E2F1能够结合于PTPRO的启动子。其次,我们发现一个小的microRNA簇—miR-17-92也能够调控PTRPO的表达。生物信息学分析发现PTPRO mRNA的3’UTR区存在miR-17-92的结合位点;报告基因的实验结果表明这些位点对于PTPRO mRNA的稳定性是重要的,miR-17-92能下调PTPRO的mRNA和蛋白水平。最后,我们发现E2F1和miR-17-92在细胞周期进程中协同调控PTPRO的表达。PTPRO的mRNA在细胞周期的S期上调,这与E2F1上调于G1/S期,以及miR-17-5p（miR-17-92家族的一个成员）上调于后S期的结果相一致。我们还分别检测了PTPRO启动子和3’UTR荧光素酶报告基因的活性,发现启动子的活性高峰出现在S早期,而3’UTR的活性则于S后期下降,这与E2F1和miR-17-92的表达是一致的。总之,我们发现PTPRO能够被E2F1和miR17-92协同调控。
论文目录
中文摘要英文摘要第一部分 研究背景一、PTPRO基因及其研究进展（一） 酪氨酸激酶（二） 酪氨酸酯酶（三） PTPRO二、细胞周期和 E2F1 基础知识及研究进展（一） 细胞周期（二） 细胞周期G1/S检验点（三） E2F1三、microRNA 基础及研究进展（一） 概述（二） microRNA的确定（三） microRNA的功能（四） 细胞周期中的microRNA（五） microRNA-17-92四、本论文研究的内容和意义第二部分 实验材料与方法一、实验材料（一） 质粒（二） 蛋白质和抗体（三） 哺乳动物细胞系（四） 试剂二、实验方法I. 生物信息学分析II. 分子生物学实验方法（一） 分子克隆（二） DNA的琼脂糖电泳（三） 质粒大量制备的方法（四） 哺乳动物细胞总RNA的提取和反转录（五） 逆转录（六） PCR和荧光适时定量realtime PCR（七） microRNA的提取和检测（八） 凝胶迟滞电泳（九） 染色质免疫沉淀实验III. 细胞生物学实验方法（一） 哺乳动物细胞系的培养（二） 真核生物细胞的瞬时转染和荧光素酶报告基因检测（三） 细胞周期同步化（四） 流式细胞术IV. 蛋白的生物化学试验方法（一） 细胞总蛋白的提取（二） 细胞核蛋白的提取（三） SDS-PAGE电泳和Western BlottingIV. 统计分析第三部分 实验结果与分析一、基因启动子,UTR 报告基因的构建二、E2F1转录调控PTPRO（一） 生物信息学分析可能参与PTPRO调控的因子（二） 过表达E2F1上调内源PTPRO的mRNA水平（三） 过表达 E2F1 能够激活 PTPRO 启动子（四） 确定PTPRO启动子上的E2F1结合元件（五） E2F1通过乙酰化激活PTPRO启动子三、microRNA-17-92靶定PTPRO（一） 生物信息学分析可能参与PTPRO调控的因子（二） PTPR03’UTR上miR-17-92位点的功能性分析（三） miR-17-92能下调PTPRO的mRNA和蛋白水平（四） miR-17-92能直接调控PTPRO四、E2F1和microRNA17-92协同调控PTPRO（一） 同时含有启动子和UTR的报告基因对E2F1的响应（二） HeLa细胞同步化PTPRO，E2F1和miR-17-92的表达框架（三） 报告基因实验辅助证实E2F1和miR-17-92对PTPRO的共调控第四部分 讨论一、PTPRO基因的转录调控二、PTPRO基因的转录后调控三、PTPRO的细胞周期性表达的意义及启示主要结论主要创新点参考文献附录在学期间公开发表论文及著作情况致谢
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标签：转录调控和转录后调控论文; 细胞周期论文;
