大豆疫霉菌无性繁殖后代毒力变异及ISSR指纹初步分析

论文摘要

本试验通过大量的单孢分离和接种鉴定,研究了大豆疫霉菌无性繁殖后代群体毒力遗传与变异,并利用ISSR-PCR分子标记分析了无性繁殖后代群体ISSR指纹与菌株毒力及地理来源的相关性,研究结果如下: 1.大豆疫霉菌1代单游动孢株群体具有丰富的毒力多样性:7个原始菌株的1代单游动孢子分离后代毒力均发生了变异,1代单游动孢株中已无与亲本毒力相同的单游动孢株,变异率高达100%。7个原始菌株中最少的分化出1种毒力公式,最多分化出6种毒力公式,但总的变异趋势是毒力减弱,即与原始菌株相比,1代单游动孢株能克服的抗病基因数量显著减少同时证明7个大豆疫霉菌原始菌株与其1代单游动孢株在毒力上表现较高的变异几率。而来源于单个原始菌株的无性繁殖后代之间的毒力基本保持一致。 2.以大豆疫霉菌Ps-F8.6菌株为实验材料,对ISSR-PCR反应体系中的模板DNA、TaqDNA聚合酶、dNTP和Mg2+的浓度进行了筛选,确定了25μl大豆疫霉菌ISSR-PCR反应体系中模板DNA的用量应在20-30ng;Mg2+浓度为2mM;dNTP浓度为0.15mM;TaqDNA聚合酶用量为1.5U时ISSR-PCR扩增效果最佳。 3.以大豆疫霉菌Ps-F8.6菌株为模板,对已有的12个引物进行筛选,从中选出可产生3条以上明显谱带的引物7个,它们是（AG）10、（AG）8T、（AG）8C、（CA）8G、（AC）8T、（AG）8YT、（GACA）4。 用上述7个引物分析大豆疫霉菌45个1代单游动孢株,共获得41个ISSR标记,其中多态性标记为31个,占75.6%。扩增后标记出的DNA片段的分子量大小的变化范围在100-2000bp之间。 用SPSS11.5软件包对大豆疫霉菌45个1代单游动孢株和疫霉属的其他4个种的DNA扩增结果进行聚类分析,结果表明,在45个1代单游动孢株中,未出现在遗传背景上完全相同的单游动孢株,表现出较高的的遗传多样性。利用7个ISSR引物可清楚地将大豆疫霉菌与疫霉属的其他4个种区别开来,但没有将疫霉属其他4个种明确区分。 4.大豆疫霉菌1代单游动孢株ISSR聚类分组与菌株毒力之间存在一定相关性,但也存在着差异。 大豆疫霉菌1代单游动孢株ISSR聚类分组与菌株来源地之间存在一定相关性,但也存在着不同。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 引言
• 1.1 大豆疫霉根腐病的研究概况
• 1.1.1 大豆疫霉根腐病的分布及危害
• 1.1.2 大豆疫霉根腐病症状
• 1.1.3 病原菌的分类地位
• 1.1.4 大豆疫霉菌的生理分化
• 1.2 疫霉菌的遗传与变异
• 1.2.1 同宗配合特性的遗传与变异
• 1.2.2 交配型的遗传与变异
• 1.2.3 影响交配型变异的因素
• 1.2.4 生长速率的遗传与变异
• 1.2.5 菌落形态的遗传与变异
• 1.2.6 毒力的遗传与变异
• 1.2.7 抗药性的遗传与变异
• 1.3 分子标记技术在植物病原真菌检测鉴定中的应用
• 1.4 简单重复序列间（Inter-simple sequence repeat，ISSR）多态性分析
• 1.4.1 ISSR技术的诞生
• 1.4.2 ISSR的原理和特点
• 1.4.3 ISSR技术的应用
• 1.5 研究目的及意义
• 1.6 研究内容
• 2 材料与方法
• 2.1 大豆疫霉菌无性繁殖后代毒力变异研究
• 2.1.1 供试菌株
• 2.1.2 供试培养基
• 2.1.3 大豆疫霉菌单游动孢株系的建立
• 2.1.4 大豆疫霉菌无性繁殖后代毒力变异研究
• 2.2 大豆疫霉菌无性繁殖后代群体ISSR指纹初步分析
• 2.2.1 供试菌种
• 2.2.2 DNA提取及PCR扩增所用试剂
• 2.2.3 DNA提取及PCR扩增所用仪器
• 2.2.4 DNA提取缓冲溶液的配制
• 2.2.5 供试ISSR引物
• 2.2.6 菌体的活化与培养
• 2.2.7 总DNA提取
• 2.2.8 总DNA浓度检测
• 2.2.9 ISSR-PCR反应程序和反应体系
• 2.2.10 ISSR-PCR扩增产物检测
• 2.2.11 扩增产物数据处理
• 3 结果与分析
• 3.1 大豆疫霉菌无性繁殖后代毒力变异研究
• 3.1.1 1代单游动孢株的毒力变异研究
• 3.1.2 大豆疫霉无性繁殖后代毒力变异
• 3.1.3 大豆疫霉1代单游动孢株间毒力变异规律
• 3.2 大豆疫霉菌ISSR-PCR反应体系的建立
• 3.2.1 模板DNA用量对ISSR扩增的影响
• 2+浓度对ISSR扩增的影响'>3.2.2 Mg²⁺浓度对ISSR扩增的影响
• 3.2.3 dNTP浓度对ISSR扩增的影响
• 3.2.4 TaqDNA聚合酶用量对ISSR扩增的影响
• 3.3 大豆疫霉菌无性繁殖后代ISSR指纹初步分析
• 3.3.1 大豆疫霉菌总DNA的检测结果
• 3.3.2 大豆疫霉菌ISSR-PCR引物筛选结果
• 3.3.3 大豆疫霉菌1代单游动孢株群体ISSR指纹初步分析
• 3.4 大豆疫霉菌无性繁殖后代ISSR聚类分析结果
• 3.4.1 大豆疫霉菌无性繁殖后代毒力与ISSR分子标记之间的关系
• 3.4.2 大豆疫霉菌1代单游动孢株地理来源与ISSR分子标记间的关系
• 4 讨论
• 4.1 关于中国大豆疫霉菌生理小种鉴别
• 4.2 关于大豆疫霉菌毒力变异
• 4.3 关于大豆疫霉菌总DNA提取
• 4.4 关于ISSR-PCR反应体系的优化
• 4.5 关于ISSR技术在大豆疫霉菌无性繁殖后代毒力变异中的应用
• 5 结论
• 5.1 大豆疫霉菌无性繁殖后代毒力变异
• 5.2 大豆疫霉ISSR-PCR反应体系的优化
• 5.3 大豆疫霉无性繁殖后代ISSR指纹初步分析
• 5.4 大豆疫霉菌无性繁殖后代ISSR聚类分析结果
• 参考文献
• 图片
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文
• 致谢