鹅胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）基因克隆测序及多态性研究

论文摘要

本实验以扬州鹅为素材,对鹅胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）基因组部分序列进行了克隆、测序,并用PCR-SSCP的方法对其多态性进行了检测。主要结果如下:1.得到了鹅IGF-Ⅰ基因的5’调控区、外显子1、4及内含子1、3的全部或部分序列,所测序得到的内含子1、内含子3和外显子4序列已上传至Genbank,序列号分别为EU072031、EU111743。本研究首次得到了鹅IGF-Ⅰ基因的内含子1和3序列。序列比对发现,鹅IGF-Ⅰ基因与鸡、鸭同源性较高,无论是外显子还是内含子都大于80%（除内含子3）,外显子1与鸡、鹌鹑、火鸡、鸭、鸵鸟、鹅等禽类同源性在98%以上,与梅花鹿、山羊、猪、牛、北极狐、绵羊、小鼠和人等哺乳动物同源性在89%～94%之间,与乌颊鱼、罗非鱼的同源性在60%～65%之间。对鹅5’调控区和外显子1序列进行转录因子结合位点和启动子区域预测,发现有多个转录因子结合位点和一个启动子区域。进化分析表明IGF-Ⅰ基因的进化与物种进化相一致,反映了IGF-Ⅰ基因在进化中的保守性及生理功能的重要性。2.根据鹅IGF-Ⅰ基因的5’调控区、外显子1和内含子1部分序列设计了7对引物,用PCR-SSCP的方法对其进行单核苷酸多态性（SNP）检测。结果未发现多态性。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一章 文献综述
• 1 DNA 分子标记技术的研究进展
• 1.1 限制性片段长度多态性
• 1.2 DNA 指纹
• 1.3 随机扩增多态性
• 1.4 扩增片段长度多态性
• 1.5 单链构象多态性
• 2 IGF-Ⅰ基因的研究进展
• 2.1 IGF-Ⅰ的发现
• 2.2 IGF-Ⅰ的生物学功能
• 2.3 IGF-Ⅰ基因的研究进展
• 3 本研究目的、意义
• 参考文献
• 第二章 鹅 IGF-Ⅰ基因的克隆与序列分析
• 1 实验目的
• 2 材料与方法
• 2.1 试验动物
• 2.2 主要仪器设备与试剂
• 2.3 分析工具软件
• 2.4 鹅血红细胞基因组 DNA 的小量提取
• 2.5 引物设计与合成
• 2.6 PCR 扩增
• 2.7 PCR 产物检测
• 2.8 PCR 扩增产物的克隆与测序
• 2.9 序列的genbank 登录
• 3 结果与分析
• 3.1 基因组DNA 提取结果
• 3.2 PCR 扩增与测序
• 3.3 序列分析
• 4 讨论
• 4.1 试验材料的选择
• 4.2 长链PCR
• 4.3 测序方式
• 4.4 内含子的扩增
• 4.5 序列分析
• 参考文献
• 第三章 鹅 IGF-Ⅰ基因的 PCR-SSCP 分析
• 1 实验目的
• 2 材料与方法
• 2.1 试验动物
• 2.2 主要仪器设备与试剂
• 2.3 分析工具软件
• 2.4 鹅血红细胞基因组DNA 的小量提取
• 2.5 引物设计与合成
• 2.6 PCR 扩增
• 2.7 PCR 产物检测
• 2.8 SSCP 分析
• 3 结果与分析
• 3.1 PCR 扩增
• 3.2 SSCP 分析
• 4 讨论
• 4.1 影响PCR-SSCP 检测的因素
• 4.2 家禽IGF-Ⅰ基因的多态性
• 4.3 IGF-Ⅰ基因的多态性检测方法
• 4.4 IGF-Ⅰ基因的多态性与生产性能的关系
• 参考文献
• 结论
• 附录
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文及序列目录