双糖链蛋白聚糖Biglycan在子宫内膜癌中的表达及意义

论文摘要

研究目的：子宫内膜癌是女性生殖道三大恶性肿瘤之一,近年来发病率呈上升趋势。和其它恶性肿瘤一样,子宫内膜癌也是由于多种因子的调控紊乱,使细胞增殖和死亡过程失衡,引起细胞异常增殖和持续分裂,最终导致癌变。双糖链蛋白聚糖（Biglycan,简称BGN）是富含亮氨酸的蛋白聚糖家族（SLRPs）的成员,是细胞外基质的组成部分。Biglycan是基因扩增的产物,广泛分布在发育的软骨、骨、纤维组织和牙周组织中。最近研究表明,Biglycan在骨肉瘤、结肠癌等肿瘤中表达增强,提示其和肿瘤的发生发展密切相关。但在子宫内膜癌中表达情况国内外未见报道,因此,本课题旨在转录和蛋白水平研究子宫内膜癌组织和细胞中Biglycan的表达情况,为探讨其在子宫内膜癌发生发展中的作用及机制奠定基础。研究方法：采用免疫组化染色方法,检测10例正常、10例非典型增生和53例子宫内膜癌组织中的Biglycan蛋白表达,分析其与临床病理指标和预后的关系。收集2002至2007年山东大学齐鲁医院病理科53例子宫内膜癌手术切除标本蜡块,平均年龄53岁,均有完整的临床及病理资料,术前均未接受化疗和放疗,其中子宫内膜腺癌41例,腺鳞癌4例,浆液性乳头状癌4例,透明细胞癌3例,鳞癌1例。按照FIGO2000分期标准,1期30例,Ⅱ期7例,Ⅲ期15例,Ⅳ期1例；组织学分级：高分化15例,中分化21例,低分化17例。另选10例正常10例非典型增生子宫内膜组织作对照。采用实时定量逆转录聚合酶链反应（Real-time RT-qPCR）检测3例不典型增生性子宫内膜和12例子宫内膜癌新鲜组织中Biglycan转录水平的表达。手术室内取患者手术切除的新鲜癌灶标本和距癌灶边缘至少5cm以外的子宫内膜癌组织,取得标本后立即放入液氮中速冻并随后转入-80℃冰箱保存,准备做逆转录聚合酶链反应。采用蛋白免疫印记（Western Blot）检测5株子宫内膜癌细胞中Biglycan的表达情况。其中ECC-1为高分化细胞株,HEC-1A和RL95-2为中分化细胞株,KLE和AN3CA为低分化细胞株。并用肝癌细胞株HepG2作为阳性对照。研究结果：（1）Biglycan在正常内膜、非典型增生子宫内膜和子宫内膜癌中的表达Biglycan蛋白阳性染色表现为细胞浆呈棕褐色。Biglycan在正常子宫内膜中表达均阴性；在非典型增生子宫内膜组织中表达阴性或弱阳性；在子宫内膜癌癌细胞中的表达评分为1.09±0.86，,在癌性间质中的表达评分为1.32±0.86,无显著差异（P>0.05）,但两者具有显著相关性（r=0.343,P=0.012）。（2）子宫内膜癌中Biglycan表达与不同临床指标间的关系Biglycan蛋白的阳性表达率与子宫内膜癌的组织类型和FIGO分期均无关（P>0.05）。在组织学分级中,Biglycan在癌细胞中的表达无显著差异（P>0.05）；但低分化组的Biglycan在癌性间质细胞中的阳性表达率均明显高于高、中分化组,差异有显著性（P<0.05）。（3）Biglycan的表达与预后的关系统计53例子宫内膜癌患者的随访资料,以1.8分作为癌性间质表达的阳性界定,在生存曲线中Biglycan癌性间质表达阳性的患者比表达阴性的患者生存时间短,预后差,差异有统计学意义（P<0.05）。（4）Real-time PCR结果显示子宫内膜癌中Biglycan mRNA的表达显著高于不典型增生性子宫内膜,其差异有统计学意义（P<0.05）。（5） Western Blot结果显示Biglycan在子宫内膜癌细胞株ECC-1、KLE中高表达,在AN3CA、HEC-1A细胞中低表达,为下一步基因转染做准备。研究结论：（1）Biglycan可能在子宫内膜癌中作为癌基因发挥作用,其可能通过作用于癌性间质在子宫内膜癌的发生发展中起重要作用。（2）Biglycan在癌性间质细胞中的表达与组织分化程度和患者的预后相关,因此,可把Biglycan作为判断子宫内膜癌患者预后的指标之一。

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