连续性血液透析滤过对多器官功能障碍犬器官功能和细胞因子的影响及作用机制研究

论文摘要

第一部分多器官功能障碍综合征动物模型的建立目的:复制符合多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome, MODS）发病因素,病理过程和临床特征的标准化动物模型。方法:15只雄性Beagle犬,体重14～16.3kg（由新疆医科大学实验动物中心提供）。实验前禁食24h,正常饮水。动物戊巴比妥钠30mg/kg静脉麻醉后,称重,固定,消毒,行气管插管术,管经口插入深26cm,插管成功后接呼吸机辅助呼吸,模式为容量控制通气（CMV）,参数为潮气量15 ml/kg、呼吸频率为20～25次/min、呼气末正压（PEEP）2～3cmH2O;行右股动脉穿刺术,置入5F动脉留置针,连接心功能监护仪行血流动力学监测;行左股静脉穿刺术,置入7F导管用于持续静点戊巴比妥钠2～4mg/kg/h和留取血标本;分别采用左颈内静脉和右股静脉留置11F单针双腔导管建立血管通路,应用CVVHDF治疗。所有导管直接插入,切口行外科缝合。间断用肝素钠盐水冲导管预防凝血。留置导尿管,心电监护,监测肛温,必要时使用电热毯保持体温在38～39℃。术后30分钟,采用Wiggers法[1]造成失血性休克,维持平均动脉压（MAP）6.0-7.3kPa （45-54mmHg）之间1小时。休克终点,经颈静脉快速回输失血和两倍失血量的林格氏液。回输毕MAP和心排指数（CI）均能恢复至伤前水平。复苏12h后由静脉持续12h滴入内毒素（大肠杆菌O111B4内毒素,第二军医大学基础医学部微生物学教研室提供）1.5mg/kg。观察实验动物犬的症状、体征、生存率、脏器功能指标,如丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、血尿素氮（BUN）和血肌酐（Cr）与组织病理变化。结果:实验前MAP分别是114.2±13.2mmHg。造成失血性休克后MAP降至54.8±6.1mmHg,复苏后恢复至正常90%左右。输入内毒素后,MAP呈进行性下降,明显低于实验前（P<0.01）。休克期PaO2和PaCO2降低,与伤前差别显著（P<0.05）;输入内毒素后,PaO2呈进行性降低,PaCO2呈明显升高趋势。在MODS病变发展过程中,实验动物在二次打击后症状、体征与功能指标（ALT、AST、BUN及Cr）均发生明显变化,肝、肾等脏器病理损伤明显。结论:该模型的致伤因素、发病过程、临床特征及诊断标准都与临床典型的双相迟发MODS相似,是目前比较理想的和适用于临床防治研究的MODS动物模型。第二部分连续性血液透析滤过对多器官功能障碍综合症犬的组织病理及功能变化的影响目的:观察连续性血液透析滤过（CVVHDF）对多器官功能障碍综合征（MODS）犬重要器官功能和组织病理的影响,探讨CVVHDF治疗MODS的可能机制。方法:15只Beagle犬采用失血性休克+复苏灌注+内毒素血症复制MODS模型[2],随机分为CVVHDF组（n=8）和MODS组（n=7）,CVVHDF组在内毒素注射完毕后给于CVVHDF治疗12小时,MODS组不给CVVHDF治疗。检测各时间点动脉血氧分压（PaO2）、动脉血二氧化碳分压（PaCO2）、血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、肌酐（Cr）、血尿素氮（BUN）及血浆内毒素（LPS）的水平,同时观察两组动物肝、肾组织病理形态学改变。结果:CVVHDF组治疗过程中,MAP基本保持在正常水平,尤其在T5、T6及T7时间点显著高于MODS组（P<0.01）;PaO2逐渐升高,与MODS组在T4、T5、T6及T7时间点相比相差显著（P<0.05）;血清肌酐（Cr）、血尿素氮（BUN）及血浆内毒素（LPS）水平较MODS组降低（P<0.05）。伤后两组动物肝、肾组织均可见不同程度的充血、灶状与大片状坏死、出血及炎性细胞浸润。CVVHDF组器官病变较MODS组明显减轻。结论:连续性血液透析滤过能明显改善内毒素诱导的低血压,提高动脉血氧分压,有效清除血浆内毒素,改善肾功能,减轻肝、肾组织病理损害。第三部分连续性血液透析滤过对多器官功能障碍犬细胞因子的影响目的:观察连续性血液透析滤过（CVVHDF）对多器官功能障碍综合征（MODS）犬器官功能和细胞因子的影响,探讨CVVHDF治疗MODS的可能机制。方法:15只Beagle犬采用失血性休克+复苏灌注+内毒素血症复制MODS模型,随机分为CVVHDF组（n=8）和MODS组（n=7）,CVVHDF组在内毒素注射完毕后给于CVVHDF治疗12小时,MODS组不给CVVHDF治疗。免疫组织化学分析两组肝、肾组织中IL-6、IL-10阳性蛋白表达。半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定两组肝、肾组织中IL-6、IL-10 mRNA水平。ELISA方法检测血浆IL-6、IL-10浓度。结果:CVVHDF治疗开始后血浆IL-6、IL-10明显下降,在内毒素注射完毕后3h（T4）、6h（T5）、9h（T6）及12h（T7）时间点显著低于MODS组（P<0.01）。超滤液中能检测出IL-6,IL-6筛选系数（SC）为0.27±0.13。超滤液中未能检测出IL-10。免疫组织化学分析两组肝、肾组织中IL-6、IL-10阳性蛋白表达,在MODS组IL-6阳性蛋白表达水平显著增高,而在CVVHDF组IL-10阳性蛋白表达水平显著增高。应用半定量RT-PCR方法测定肝肾组织IL-6、IL-10 mRNA表达水平,在MODS组IL-6 mRNA表达水平显著高于正常水平和CVVHDF组（P<0.01）,而在CVVHDF组IL-10mRNA表达水平显著高于正常水平和MODS组（P<0.01）。结论:CVVHDF能有效清除循环中细胞因子IL-6、IL-10,有助于重建机体免疫系统内稳状态。超滤液中能检测出IL-6,表明CVVHDF治疗通过对流机制可以有效清除血浆中的IL-6。超滤液中未能检测出IL-10,故可推理CVVHDF可能通过吸附而非超滤作用清除IL-10。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 1.连续性血液净化治疗多器官功能衰竭的应用理论基础与可能的作用
• 2.连续性静脉静脉血液透析滤过的优越性
• 3.建立 MODS 动物模型的必要性
• 4.双相迟发 MODS 犬动物模型的建立
• 第一部分 多器官功能障碍综合征动物模型的建立
• 材料和方法
• 1. 模型制作与分组
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验动物麻醉
• 1.3 手术经过
• 1.4 MODS 诊断标准
• 2. 检测指标与方法
• 2.1 动态检测指标变化
• 2.2 生理指标观察
• 2.3 器官功能指标
• 2.4 血浆内毒素含量
• 2.5 病理学检查
• 3. 统计学方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第二部分 连续性血液透析滤过对多器官功能障碍综合症犬的组织病理及功能变化的影响
• 材料和方法
• 1. 模型制作与分组
• 1.1 实验动物
• 1.2 余步骤略
• 2. CVVHDF 方法
• 2.1 采用PRISMA-TM 型智能化床旁肾脏替代治疗机（瑞典）
• 2.2 血滤器
• 2.3 血管通路
• 2.4 置换液配方为
• 2.5 抗凝方式
• 3. 检测指标与方法
• 3.1 动态检测指标变化
• 3.2 器官功能
• 3.3 血浆内毒素含量
• 3.4 病理学检查
• 4. 统计学方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第三部分 连续性血液透析滤过对多器官功能障碍犬器官功能和细胞因子的影响
• 材料和方法
• 1. 模型制作与分组
• 2. CVVHDF 方法
• 3. 检测指标与方法
• 3.1 动态检测指标变化
• 3.2 CVVHDF 组
• 3.3 IL-6、IL-10 含量测定
• 3.4 免疫组织化学测定肝、肾组织IL-6、IL-10 阳性蛋白表达
• 3.5 半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定肝、肾组织1L-6、IL-10mRNA 的表达水平
• 4. 统计学方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 结论与创新之处
• 1.结论
• 2.创新之处
• 3.本实验最重要的创新之处在于
• 致谢
• 参考文献
• 综述 连续性血液净化在多器官功能障碍综合症中的应用
• 发表学术论文及承担课题
• 个人简历
• 导师评阅表