迟发的遗传性视网膜色素变性与CRX基因突变相关性的研究

论文摘要

背景:原发性视网膜色素变性（Retinitis pigmentosa RP）是一种进行性遗传性视网膜疾病,可进行性损害视细胞,其世界范围内的发病率约为1/3500,我国发病率约为1/3784,此病无明显发病诱因,但世界范围内的分子生物学研究表明,本病为严重的遗传性疾病,具有家族聚集特性,典型遗传方式为:常染色体显性遗传（占20%）、常染色体隐性遗传（占37%）、X染色体性连锁隐性遗传（占5%）,极少数表现为双基因突变遗传和线粒体遗传,另外,仍有39%-50%的病例表现为散发或自然发生的病例。目前国内外已成功克隆出突变基因约40个,其中CRX基因（视椎体-杆体同源盒基因）的编码序列的Arg41Trp突变已在美国、德国、日本、芬兰等国家相继发现,而中国地区还未见报道。CRX基因是一个光感受器特异性转录因子,位于人类基因组19q13.3,含外显子3个,为OTX（校正同源基因家族）的同源基因,并表达光感受器受体结合蛋白,控制RHO基因（视紫红质基因,一种最常见的导致RP的显性遗传基因）的起始活性,CRX基因突变可导致蛋白质的转录功能下降,引起迟发的遗传性视网膜色素变性,也可引起先天性黑朦,常染色体显性遗传的视锥视杆营养不良等多种临床疾病。目的:本实验是通过对中国辽宁省东南地区一个迟发的遗传性视网膜色素变性家系进行CRX基因分析,以明确其发病是否与CRX基因突变有相关性。方法:于大连医科大学第一附属医院眼科门诊收集原发性视网膜色素变性患者（包括家族性和散发性）,通过病史、发病年龄、临床表现、相关仪器检查等筛选出符合迟发的常染色体显性遗传视网膜色素变性家系一个,家系成员共有22人（年龄15-78岁）,女10人,男12人,发病成员占9名（女4人,男5人）,其余为正常家系同胞及配偶。在签署抽血知情同意书后,抽取每人外周血2ml,提取白细胞DNA,然后应用紫外光分度法检测DNA的浓度和纯度;应用Primer5引物设计软件进行所研究基因CRX的三个外显子（含编码区域）的引物设计,共设计三对引物,之后应用聚合酶链反应方法（PCR）对CRX基因的编码区域进行反应扩增,扩增出的PCR产物行琼脂糖凝胶电泳测定,以明确扩增产物是否为目的基因片段,待PCR产物纯化后进行直接测序,将测序结果与正常人类基因组中CRX基因序列对比,以查明整个家系中CRX基因是否有突变位点产生。研究国人CRX基因突变是否存在于迟发的RP患者中。结果:本实验通过对一个迟发的RP家系的CRX基因的三个外显子及编码区域进行PCR扩增及直接测序,所得测序片段中,未能发现任何与所研究疾病相关的外显子或邻近拼接位点的突变。提示这一迟发的遗传性视网膜色素变性家系的致病因素与CRX基因突变无显著相关性。结论:中国辽宁东南区域这一迟发的遗传性视网膜色素变性家系的致病因素与CRX基因突变无显著相关性。在分子遗传学角度上,视网膜色素变性（RP）存在相当大的遗传异质性,提示同一个基因在不同的国家或种族中,其致病性具有差异性。

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