论文摘要
第一部分骨髓间充质干细胞的体外培养及鉴定目的:建立兔骨髓间充质干细胞（MSCs）体外培养、扩增和鉴定的方法,了解其作为椎间盘组织工程种子细胞的可行性。方法:穿刺兔股骨大转子抽取骨髓4ml,培养、扩增、传代,倒置显微镜下观察原代和传代细胞的生长特性,流式细胞仪分析细胞表面标记物CD44、CD45。细胞经过诱导分化后进行Ⅱ型胶原免疫组化染色、阿利新蓝染色、碱性磷酸酶染色及钙结节染色。结果:体外成功建立兔骨髓间充质干细胞培养扩增的方法,并成功诱导出成骨、软骨细胞。骨髓MSCs表达CD44,不表达CD45。Ⅱ型胶原免疫组化染色,阿利新蓝染色,ALP染色及钙结节染色阳性。结论:全骨髓法能有效分离纯化和扩增骨髓MSCs,培养的细胞具有骨髓MSCs的基本表型和特征,该细胞经诱导后能表现类软骨细胞的特性,是一种有效的椎间盘组织工程种子细胞。第二部分针刺抽吸法诱导椎间盘退变动物模型的建立目的:探讨针刺抽吸法建立椎间盘退变动物模型的可行性。方法:新西兰大白兔18只,用21G皮肤穿刺针从椎间隙正前方刺入L3/4、L4/5、L5/6椎间盘的纤维环,深度控制在5mm,拔出针芯,抽吸出部分髓核组织。术前及术后4、8、12周分别对造模后椎间盘及对照椎间盘（L2/3）行MRI及CR检查,并行免疫组化及组织学观察。结果:术后第4周到第12周,造模后的椎间盘MRI的T2W1信号呈现持续减弱趋势;椎间盘高度指数持续下降;免疫组化及组织学检查显示髓核细胞的数量及Ⅱ型胶原含量较对照间盘进行性减少,细胞凋亡率明显增加（P<0.01）。结论:针刺抽吸法可诱导兔椎间盘的缓慢退变,为研究椎间盘退行性变的机理及治疗提供有效的载体。第三部分兔骨髓间充质干细胞在退变椎间盘环境中存活及迁移能力的实验研究目的:探讨兔骨髓间充质干细胞在退变椎间盘环境中存活及迁移能力,为进一步研究提供实验基础。方法:新西兰大白兔9只,穿刺法诱导椎间盘退变模型建立2周后每个退变椎间盘移植入BrdU标记的骨髓间充质干细胞纤维蛋白凝胶TGF-β1复合物0.04ml,术后2、4、8周将兔处死,取L3/4,L4/5,L5/6的9个椎间盘髓核组织进行BrdU免疫组织化学染色,随机取9个L2/3髓核作为对照组,计数10个高倍视野中BrdU阳性细胞数。结果:BrdU免疫组化染色可见在2、4、8周均有阳性染色细胞,细胞数为157.11±17.45、68.56±16.89、79.78±22.11,4周及8周组间无统计学意义,P>0.05,其余各组间有统计意义,F=74.59,P<0.01。纤维蛋白移植区阳性细胞数量随时间推移逐渐减少后保持一定数量,部分细胞向髓核组织迁移,正常对照组未见阳性细胞。结论:兔骨髓间充质干细胞复合纤维蛋白凝胶TGF-β1移植后能在退变椎间盘环境中存活及迁移,为椎间盘退变的组织工程学研究奠定了实验基础。第四部分骨髓间充质干细胞复合可注射型纤维蛋白凝胶TGF-β1移植治疗兔椎间盘退变的实验研究目的:探讨兔骨髓间充质干细胞移植抑制椎间盘退变的可行性,为后续的临床研究提供实验基础。方法:新西兰大白兔54只,随机分为3组:（1）退变模型组,（2）单纯纤维蛋白凝胶TGF-β1移植组（,3）骨髓间充质干细胞纤维蛋白凝胶TGF-β1移植组,每组18只。退变模型组单纯用针刺法诱导建立退变模型,单纯纤维蛋白凝胶TGF-β1移植组及骨髓间充质干细胞纤维蛋白凝胶TGF-β1移植组退变模型诱导两周后分别移植入纤维蛋白凝胶TGF-β1复合物及骨髓间充质干细胞纤维蛋白凝胶TGF-β1复合物,分别于术后4、8、12周（移植术后2、6、10周）行CR、MRI及病理检查。结果:椎间盘高度指数（DHI）在退变模型组及单纯支架移植组中下降明显,与时间呈正相关;正常对照组及干细胞移植组下降较缓慢。MRI结果显示退变模型组及支架移植组随时间的推移,退变逐渐加重,干细胞移植组退变不明显。免疫组化及组织学检查显示退变模型组髓核细胞的数量及Ⅱ型胶原含量较对照间盘进行性减少,细胞凋亡率明显增加,单纯支架移植组与退变模型组相似,干细胞移植组髓核细胞的数量及Ⅱ型胶原含量较退变组及单纯支架移植组明显增多,细胞凋亡率下降。结论:干细胞移植能明显抑制椎间盘退变,为进一步的研究奠定了实验基础。
论文目录
相关论文文献
- [1].探讨TGFβ1、PDGF、VEGF对特发性肺纤维化诊断及病情评估的临床意义[J]. 中华肺部疾病杂志(电子版) 2020(01)
- [2].TGF-β1、PDGF、VEGF评估吡非尼酮治疗特发性肺纤维化的临床疗效观察[J]. 临床肺科杂志 2020(02)
- [3].血液净化联合血必净治疗热射病的临床效果及对TGF-β水平的影响[J]. 临床医学研究与实践 2020(06)
- [4].TGF-β1表达与舌鳞癌发生发展的相关性研究[J]. 中国现代医生 2020(04)
- [5].伊马替尼早期对慢性粒细胞白血病患者血清COX-2、bFGF及TGF-β1表达的影响[J]. 医学理论与实践 2020(09)
- [6].黔北人群TGFα基因多态性与非综合征性唇腭裂的相关性研究[J]. 基因组学与应用生物学 2020(03)
- [7].斑石鲷TGF-β1基因克隆和表达分析[J]. 渔业科学进展 2020(03)
- [8].机体的肾脏纤维化情况与TGF-β1信号通路关联性研究综述[J]. 智慧健康 2020(11)
- [9].TGF-β_1+915G/C基因多态性与慢性肾炎临床表现的相关性分析[J]. 现代中西医结合杂志 2020(17)
- [10].布地奈德辅助治疗小儿支气管哮喘的临床效果及对患儿血清TGF-β1、VEGF表达的影响[J]. 中国现代医生 2020(11)
- [11].TGF-β_1在放射性颌骨骨髓炎发病过程中对骨髓间充质干细胞的影响及其分子机制的体外研究[J]. 实用口腔医学杂志 2020(03)
- [12].酮替芬联合氯雷他定治疗小儿咳嗽变异性哮喘的效果及对血清TGF-β1的影响[J]. 中国现代医生 2020(17)
- [13].噻托溴铵对老年慢性阻塞性肺病加重期患者肺功能及MMP-9、TGF-β、TIMP-1水平的影响[J]. 现代医学与健康研究电子杂志 2020(09)
- [14].TGF-β与冠心病及相应药物的研究进展[J]. 西南医科大学学报 2020(04)
- [15].TGF-β轴在骨巨细胞瘤中的表达[J]. 中国矫形外科杂志 2019(22)
- [16].TGF-β1在糖尿病性视网膜病变中的作用[J]. 中南医学科学杂志 2017(01)
- [17].外源性硫化氢对肝星状细胞TGF-β_1表达的影响[J]. 山东医药 2017(08)
- [18].新疆人群TGF-α基因多态性和非综合征性唇腭裂风险易感性相关性研究[J]. 新疆医科大学学报 2017(04)
- [19].TGF-β_1和VEGF在胃癌组织中的表达及临床意义分析[J]. 医药论坛杂志 2017(01)
- [20].TGF-β与转录因子在肝纤维化中的相互作用[J]. 微生物学免疫学进展 2016(06)
- [21].PTEN与TGF-β在前列腺癌中的表达及其临床意义[J]. 解放军医药杂志 2016(11)
- [22].慢性肺源性心脏病患者血清TGF-β1水平的临床意义[J]. 临床医学研究与实践 2017(06)
- [23].COX-2、bFGF及TGFβ1在急性白血病中的表达及其临床意义[J]. 临床医学研究与实践 2017(07)
- [24].血府逐瘀胶囊对肺癌患者放射性肺损伤血TGF-β_1影响的临床研究[J]. 现代中西医结合杂志 2017(12)
- [25].中医药基于TGF-β1治疗糖尿病肾病研究概况[J]. 中医药临床杂志 2017(02)
- [26].氯沙坦联合骨化三醇对糖尿病肾病患者血清TGF-β1的影响[J]. 锦州医科大学学报 2017(01)
- [27].TGF-β在炎症性肠病肠纤维化中的作用[J]. 实用临床医学 2017(05)
- [28].TGF-β1在原发性胆汁性肝硬化患者血清中的表达及与肝脏功能的关系[J]. 实用医学杂志 2017(08)
- [29].TGF-β1、PTEN在口腔鳞癌组织中的表达及意义[J]. 黑龙江医药科学 2017(03)
- [30].TGF-β1在涎腺腺样囊性癌发生发展中的研究进展[J]. 现代肿瘤医学 2017(18)
标签：骨髓间充质干细胞论文; 全骨髓培养法论文; 体外论文; 腰椎间盘退变论文; 模型论文; 动物论文; 针刺抽吸法论文; 退变环境论文; 存活论文; 迁移论文; 可注射型论文; 纤维蛋白凝胶论文; 椎间盘退变论文;