针药结合诱导骨髓间充质干细胞定向分化为软骨细胞的实验研究

论文摘要

目的：观察针药结合对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞增殖及糖胺聚糖含量、Ⅱ型胶原表达的影响,以探讨针药结合对大鼠骨髓间充质干细胞向软骨细胞转化的定向诱导作用和辅助改善作用。方法：取20只SD大鼠,电针针刺7天,颈总动脉取血制备血清。另取30只4周龄SD大鼠骨髓中分离骨髓间充质干细胞,体外传代培养,取第3代骨髓间充质干细胞分为对照组、针刺血清组、丹参注射液组及针药组,通过不同条件诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化。倒置显微镜下观察原代培养的骨髓间充质干细胞形态变化,运用MTT法观察各组对骨髓间充质干细胞增殖的影响,采用阿利新蓝法计算各组培养液内糖胺聚糖（GAG）含量并比较各组之间分泌GAG的不同,运用免疫组织化学染色方法检测各组中软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响。结果：①刚分离接种的细胞镜下呈圆形,大小不一,数目较多,随着培养时间的延长,贴壁细胞聚集生长,呈集落状态,细胞形态为典型梭形细胞。原代培养约6-7 d左右,细胞融合成单层,细胞梭形突起变长,排列有明显方向性。培养约10d左右,细胞融合约80%。传代后生长更加迅速,传代细胞呈均一长梭形、多角形、短梭形,紧密排列似旋涡状。②与对照组相比,丹参注射液及针药结合均能够促进骨髓间充质干细胞的增殖（P<0.05）,针药组作用更明显（P<0.01）；针刺血清不能促进骨髓间充质干细胞的增殖（P>0.05）。③丹参注射液组及针药结合组培养液GAG的含量与对照组GAG的含量相比有明显升高（P<0.05）,针药组更为明显（P<0.01）；针刺血清则不能提高培养液GAG的含量（P>0.05）。④免疫组织化学染色Ⅱ型胶原阳性表达为棕黄色染色,主要定位于细胞外基质,丹参组和针药组均有Ⅱ型胶原表达,针药组比丹参组表达强；针刺组和对照组没有Ⅱ型胶原表达。结果表明针药组可以有效的促进Ⅱ型胶原表达,较丹参组效果好,针刺组并不能促进Ⅱ型胶原的表达。结论：复方丹参注射液和针药结合的方法均能够促进骨髓间充质干细胞的增殖,并能够诱导骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞,针刺血清没有这种作用,但针药结合的方法较单纯应用复方丹参注射液在这两方面的作用更加明显。

论文目录

• 目录
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 实验研究
• 实验一 大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养与形态学观察
• 1 实验目的
• 2 实验材料
• 3 实验方法与步骤
• 4 结果
• 5 讨论
• 6 小结
• 实验二 针药结合对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响
• 1 实验目的
• 2 实验材料
• 3 实验方法与步骤
• 4 统计学分析
• 5 结果
• 6 讨论
• 7 小结
• 实验三 针药结合促进大鼠骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的影响
• 1 实验目的
• 2 主要实验材料
• 3 实验方法
• 4 统计学分析
• 5 结果
• 6 讨论
• 7 小结
• 第二部分 结论与展望
• 1 结论
• 2 展望
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间取得的学术成果
• 1 研究生学习期间,在导师指导下参与课题研究情况
• 2 发表学术论文情况
• 致谢