鲑鱼降钙素肺部吸入粉雾剂的研究

论文摘要

本研究以鲑鱼降钙素为模型药物,系统地研究了鲑鱼降钙素肺部吸入粉雾剂的处方和制备工艺,对其理化性质进行了评价,并对该粉雾剂在大鼠体内的药效学进行了研究。主要研究结果如下:1分别建立了茶碱和鲑鱼降钙素的含量测定方法茶碱作为处方筛选前期的替代药,采用UV-vis方法进行测定。在4.24μg/mL～15.26μg/mL浓度范围内,药物浓度与紫外吸收值线性关系良好,样品溶液在室温下放置12小时稳定。鲑鱼降钙素含量以HPLC二元梯度法测定。含量测定线性范围为2.12μg·mL-1～21.2μg·mL-1。回归方程及相关系数为:A=40170c+1872,r=0.9993;方法精密度、重现性良好,RSD分别小于2.54%,1.46%;回收率为100.4±3.3%,样品溶液室温放置4h稳定。2粉雾剂质量评价指标的建立建立了鲑鱼降钙素肺部吸入粉雾剂的多项评价指标,为制剂的评价提供合理依据,主要分为两大类评价指标:（1）影响粉雾剂吸入性能的理化性质:引湿性、水分含量、表面形态、粒度及其分布、密度、休止角:（2）体外沉积效果评价指标:雾化特性、体外沉积性质、排空率。3鲑鱼降钙素肺部吸入粉雾剂的制备采用喷雾干燥法制备鲑鱼降钙素肺部吸入粉雾剂,重点对处方和制备工艺进行了研究。考察以乳糖、甘露醇、右旋糖苷、亮氨酸作为单一载体时粉雾剂的各项理化性质与雾化性能,结果单一载体不能获得满意的吸入效果。甘露醇与亮氨酸以50∶50（w/w）的比例作混合载体时,可得到具有适宜空气动力径、较好的流动性与较高沉积率的粉雾剂。在此基础上,在处方中添加总固体含量2%的泊洛沙姆188,并用冰醋酸溶液调节喷干溶液的pH值,可起到保护鲑鱼降钙素的作用。泊洛沙姆还有改善粉末的流动性与沉积率的效果。最终确定的处方为:鲑鱼降钙素2mg,甘露醇500mg,亮氨酸500mg,泊洛沙姆188 20mg,冰醋酸适量。采用多指标综合评价法对喷雾干燥工艺进行优化,以产品收率、粉末的空气动力学径、休止角及含水量为考察指标,得到最佳的喷雾干燥条件为:进口温度:110℃;溶液浓度:0.5%（w/v）;雾化压力:180KPa;干燥气流速:0.6m3·min-1;供液速度:7.0mL·min-1。对自制的三批鲑鱼降钙素肺部吸入粉雾剂进行理化性质研究,结果表明:本品具有引湿性,流动性稍差;药物含量和含水量分别为82.7±0.4%、0.52±0.07%;排空率为97.0%,有效部位沉积量为45.4%。粉雾剂的空气动力学径为2.7μm,粒径跨度为1.49μn,表明该制剂粒度分布较均匀,部分能够沉积于肺泡部位。在4～8℃、相对湿度小于25%的条件下,粉雾剂在3个月内稳定,外观形状、粒径分布、含量以及体外沉积性质均无明显改变。4鲑鱼降钙素效价的测定通过邻甲酚酞络合酮法（OCPC）对大鼠血清钙进行了测定,经量反应平行线测定随机设计（2.2）法计算鲑鱼降钙素吸入粉雾剂的效价为8.169IU/mg,可信限率为38.1%,符合药典规定。5鲑鱼降钙素大鼠体内药效学研究建立了动物吸入给药模型,鲑鱼降钙素吸入粉雾剂经大鼠气管插管进行肺部给药,与空白组相比具有明显的降血清钙作用。与皮下注射溶液剂相比,粉雾剂的药理相对生物利用度为76.3%。体内药效学研究表明本品的生物利用度较高,有利于开发成适于临床应用的鲑鱼降钙素非注射给药制剂。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一章 茶碱及鲑鱼降钙素含量测定方法与制剂评价指标的建立
• 1 材料与仪器
• 1.1 材料
• 1.2 仪器
• 2 实验方法与结果
• 2.1 茶碱UV-vis体外分析方法的建立
• 2.1.1 检测波长的确定
• 2.1.2 标准曲线的建立
• 2.1.3 含量测定方法
• 2.1.4 精密度试验
• 2.1.5 回收率测定
• 2.1.6 稳定性试验
• 2.2 鲑鱼降钙素体外分析方法的建立
• 2.2.1 试液的配制
• 2.2.2 色谱方法系统适用性研究
• 2.2.2.1 色谱条件
• 2.2.2.2 方法专属性
• 2.2.2.3 理论板数及分离度
• 2.2.2.4 线性关系考察
• 2.2.2.5 检测限与定量限
• 2.2.2.6 精密度
• 2.2.2.7 重现性
• 2.2.2.8 稳定性
• 2.2.2.9 回收率
• 2.2.3 含量测定方法
• 2.3 鲑鱼降钙素部吸入粉雾剂评价指标的建立
• 2.3.1 与粉雾剂相关的理化性质指标
• 2.3.1.1 引湿性（hygroscopicity）
• 2.3.1.2 粉末形态（powder morphology）
• 2.3.1.3 粒径及其分布（particle size and distribution）
• 2.3.1.4 休止角（angle of repose）
• 2.3.1.5 水分含量（moisture content）
• 2.3.1.6 密度（density）
• 2.3.2 粉雾剂吸入模拟试验评价指标
• 2.3.2.1 雾化特性（aerosolisation property）
• 2.3.2.2 排空率（dumping ratio）
• 2.3.2.3 体外沉积性质（deposition property in vitro）
• 3 讨论
• 3.1 替代药物的选择
• 3.2 鲑鱼降钙素分析
• 3.2.1 色谱条件
• 3.2.2 酶联免疫分析（ELISA）
• 3.2.3 溶液稳定性
• 3.2.4 接收液选择
• 3.3 与粉雾剂相关的理化性质指标
• 3.4 粉雾剂吸入模拟试验评价指标
• 4 本章小结
• 第二章 鲑鱼降钙素肺部吸入粉雾剂的制备
• 1 仪器与材料
• 1.1 仪器
• 1.2 材料
• 2 实验方法与结果
• 2.1 以茶碱作替代药进行载体筛选
• 2.1.1 粉雾剂的制备
• 2.1.2 单一载体的选择
• 2.1.3 混合载体比例的筛选
• 2.2 鲑鱼降钙素粉雾剂的制备
• 2.2.1 粉末形态的观察
• 2.2.2 主要评价指标测定结果
• 2.2.3 泊洛沙姆对粉雾剂性质的影响
• 2.2.4 溶液pH值对降钙素含量的影响
• 2.3 制备工艺优化
• 2.3.1 单因素考察
• 2.3.1.1 气流量的选择
• 2.3.1.2 进口温度的选择
• 2.3.1.3 供液速度的选择
• 2.3.1.4 雾化压力的选择
• 2.3.1.5 溶液浓度的选择
• 2.3.2 正交设计试验
• 2.3.2.1 实验因素及水平
• 2.3.2.2 考察指标的测定
• 2.3.2.3 多指标评价结果
• 2.4 处方及工艺
• 2.4.1 鲑鱼降钙素吸入粉雾剂的处方
• 2.4.2 制备工艺
• 3 讨论
• 3.1 糖类保护蛋白质多肽类药物的机制
• 3.2 亮氨酸对粉雾剂性质的影响
• 3.3 pH值的选择
• 3.4 制备工艺的选择
• 3.5 喷雾干燥工艺的收率问题
• 3.6 工艺参数的影响
• 3.7 水分对蛋白多肽类粉雾剂的影响
• 3.8 泊洛沙姆对粉雾剂性质的影响
• 3.9 粒子的表面形态对雾化性能的影响
• 4 本章小结
• 第三章 鲑鱼降钙素肺部吸入粉雾剂理化性质的研究及初步稳定性考察
• 1 仪器与材料
• 1.1 仪器
• 1.2 材料
• 2 实验方法与结果
• 2.1 鲑鱼降钙素吸入粉雾剂的制备
• 2.2 鲑鱼降钙素含量测定
• 2.3 与粉雾剂相关的理化性质指标
• 2.3.1 含量均匀度
• 2.3.2 粉末形态的观察
• 2.3.3 引湿性及吸湿曲线
• 2.3.4 密度与休止角的测定
• 2.3.5 粒径及其分布
• 2.3.6 粉末含水量
• 2.4 粉雾剂吸入模拟试验评价指标
• 2.4.1 粉末雾化特性
• 2.4.2 排空率
• 2.4.3 体外沉积性质的测定
• 2.5 体外沉积性质的影响因素
• 2.5.1 气体流速的影响
• 2.5.2 胶囊类型的影响
• 2.5.3 湿度的影响
• 2.6 鲑鱼降钙素吸入粉雾剂的初步稳定性研究
• 2.6.1 外观性状
• 2.6.2 粒径及其分布
• 2.6.3 含量测定
• 2.6.4 体外沉积性质
• 3 讨论
• 4 本章小结
• 第四章 大鼠血清钙法测定粉雾剂中鲑鱼降钙素的效价
• 1 仪器与材料
• 1.1 仪器
• 1.2 材料
• 2 方法与结果
• 2.1 牛血清白蛋白溶剂的配制
• 2.2 标准品溶液的配制
• 2.3 供试品溶液的配制
• 2.4 动物分组
• 2.5 血清钙测定
• 2.5.1 邻甲酸酚酞络合酮法原理
• 2.5.2 钙标准系列溶液的配制
• 2.5.3 钙显色剂的配制
• 2.5.4 样品处理
• 2.5.5 线性回归方程
• 2.5.6 精密度试验
• 2.5.7 回收率试验
• 2.5.8 样品分析
• 2.6 数据处理
• 3 讨论
• 3.1 邻甲酚酞络合酮法
• 3.1.1 反应温度与时间
• 3.1.2 取血时间的选择
• 3.1.3 给药途径的选择
• 3.1.4 血清样品的制备
• 3.1.5 测定方法的选择
• 3.2 量反应平行线测定随机设计（2.2）法
• 4 本章小结
• 第五章 鲑鱼降钙素肺部吸入粉雾剂大鼠体内药效学研究
• 1 仪器与材料
• 1.1 仪器
• 1.2 材料
• 2 实验方法与结果
• 2.1 大鼠气管给药
• 2.2 血样采集及预处理
• 2.3 血清钙浓度的测定
• 2.4 药理动力学测定结果
• 3 讨论
• 4 本章小结
• 全文结论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表论文情况
• 致谢