南丰蜜桔黑斑病病原鉴定、病害循环及防治研究

论文摘要

南丰蜜桔（Nanfeng tangerine）属芸香科（Rutaceae）柑桔属（Citrus）,是一种具有很高食用和药用价值的栽培植物。近几年,江西省南丰蜜桔上的黑斑病发生严重,直接影响了当地的经济效益。本实验对南丰蜜桔黑斑病的症状、病原鉴定、生物学特性、室内药剂筛选、病害循环、田间药剂及农业防治进行了研究,结果如下：1.病害症状该病主要为害果实,成熟果实受害最重。树枝和叶片也能被为害,但很少发生,症状与果实上病斑相似。-该病发生后,病果果皮表面产生圆形病斑,初呈红褐色小斑,直径多为1-3 mm,中间凹陷,周围有暗红色晕圈,后期病斑逐渐转为褐色至黑褐色,病斑中部明显可见细小的黑色粒点状分生孢子器。2.病原鉴定病菌在PDA培养基上培养,菌丝初期灰白色,后转为黑褐色,生长缓慢,短而密集,像山丘。15d左右即长满了分生孢子器,分生孢子器呈球形,黑褐色,炭质,大小为120～350μm×85-190μm,孔口直径14-20μm,并有白色粘液（内含分生孢子）涌出。分生孢子为卵圆形和短杆形,单胞,无色。卵圆形孢子大小为8.4～11.7μm×5.4-6.8μm；短杆形孢子大小为6～7.5μm×1.9～2.5μm。提取基因组DNA,并获得rDNA-ITS序列,通过NCBI网上核苷酸比对进行同源性比较,结果表明供试菌株与Poma citricarpa McAlpine的同源性高达99%。根据形态学特征和分子鉴定结果,将该病原菌鉴定为Phoma citricarpa McAlpine。3.病菌生物学特性病原菌生物学特性研究结果表明,病菌在5-35℃的范围内均能生长,25℃为菌丝生长的最适温度。适宜pH值范围为5-7,最适pH值为6；在不同培养基中,菌丝在PDA培养基上生长最快,在OA培养基上菌落周围产生一定量的黄色素；光照时间长短对菌丝生长影响不大。4.室内药剂筛选10种药剂筛选结果表明：50%醚菌酯抑菌效果最好,EC5o为0.0199pg/m1；40%氟硅唑次之,EC5o为0.0209pg/ml；25%咪鲜胺、10%苯醚甲环唑、25%吡唑醚菌酯、30%金核霉素、70%农用链霉素、70%甲基托布津和80%代森锰锌的药效依次下降；50%多菌灵抑菌效果最差,EC5o为4.3306μg/ml。5.病害循环南丰蜜桔黑斑病病原菌主要以分生孢子器或菌丝在落叶和果园土壤中越冬,分生孢子经气流、雨水传播,主要从新叶、花期、幼果期自然孔口或伤口侵入。果实在5月下旬开始出现病斑,高峰期一般出现在10月中旬至10月下旬,11月病情增长缓慢。该病的发生发展与病原基数和当地气候条件密切相关,气温、降雨量和相对湿度很大程度上决定了发病程度。5.防控技术实验结果表明：清园与树冠管理的防治效果最好,防效达到48.25%；其次是深翻土层,防效达到27.28%；而肥料和水分防治效果较差。大田药剂防治以50%醚菌酯4000倍防治效果最好,防治效果为99.35%；依次是10%苯醚甲环唑1000、80%代森锰锌与70%甲基托布津复配500倍、80%代森锰锌400倍、50%醚菌酯5000倍、40%氟硅唑7000、50%醚菌酯6000倍、10%苯醚甲环唑1500倍、防治效果达83.56%以上；对照药剂50%多菌灵500倍防治效果最差仅为30.70%。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 文献综述
• 1. 南丰蜜桔概述
• 1.1 南丰蜜桔特性
• 1.3 南丰蜜桔的价值
• 2. 南丰蜜桔的主要病害
• 3. 综合防治方法
• 3.1 农业防治方法
• 3.2 化学防治
• 4. 柑桔黑斑病的研究现状
• 4.1 国外研究现状
• 4.2 国内研究现状
• 5. 茎点霉的分类及鉴定
• 6. ITS序列分析在真菌鉴定中的应用
• 6.1 核糖体rDNA的结构及其特点
• 6.2 ITS序列在真菌分子系统学研究中的应用
• 7. 研究目的及意义
• 第一章 柑桔黑斑病症状及病原鉴定
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 南丰蜜桔黑斑病病叶、病果采集
• 1.1.2 病原菌的分离培养与纯化
• 1.2 病原菌的接种及再分离
• 1.3 病原菌的形态学鉴定
• 1.3.1 菌落形态、分生孢子形态观察
• 1.3.2 形态学鉴定依据
• 1.4 rDNA-ITS分子鉴定
• 1.4.1 菌丝体的培养、收集
• 1.4.2 DNA提取
• 1.4.3 扩增引物
• 1.4.4 PCR反应体系与反应条件
• 1.4.5 序列分析
• 2 结果与分析
• 2.1 症状
• 2.2 病原菌的接种及再分离
• 2.3 病原菌的形态学鉴定
• 2.3.1 病菌形态学观察
• 2.3.2 形态学鉴定
• 2.4 PCR鉴定
• 3. 结果与讨论
• 第二章 南丰蜜桔黑斑病菌生物学特性研究
• 1. 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 供试菌株
• 1.1.2 仪器及试剂
• 1.2 方法
• 1.2.1 温度对菌丝生长的影响
• 1.2.2 不同培养基上菌落形态观察
• 1.2.3 pH对菌丝生长的影响
• 1.2.4 不同光照对菌丝生长的影响
• 2. 结果与分析
• 2.1 温度对菌丝生长的影响
• 2.2 不同培养基上菌落形态观察
• 2.3 pH对菌丝生长的影响
• 2.4 不同光照对菌丝生长的影响
• 3 讨论
• 第三章 柑桔黑斑病病害循环
• 1. 材料与方法
• 1.1 试验地概况
• 1.2 病原菌的越冬场所
• 1.3 侵染途径的确定
• 1.4 菌种在土壤中的越冬情况
• 1.5 田间病害发生发展情况
• 2. 结果与分析
• 2.1 病原菌越冬场所
• 2.2 侵染途径
• 2.4 病菌在土壤中越冬情况
• 2.5 病害的发生发展时期
• 3. 结论与讨论
• 第四章 杀菌剂的室内筛选
• 1. 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 供试药剂
• 1.3 杀菌剂的毒力测定方法
• 1.4 数据统计分析
• 2. 结果与分析
• 3. 小结与讨论
• 第五章 防控技术
• 1. 材料
• 1.1 供试药剂
• 1.2 供试果园
• 2. 方法
• 2.1 试验设计
• 2.1.1 2010年农业栽培措施
• 2.1.2 2009年农药小区防治试验
• 2.1.3 2010年农药大田试验
• 2.2 喷药方法
• 2.3 药效调查
• 2.3.1 调查方法及分级标准
• 2.3.2 调查时间及数据处理
• 3. 结果与分析
• 3.1 农业栽培措施结果
• 3.2 2009年农药田间防治试验结果
• 3.3 2010年农药田间防治试验结果
• 4. 讨论
• 全文小结
• 参考文献
• 附录Ⅰ 南丰蜜桔黑斑病菌DNA提取所需试剂的配制
• 附录Ⅱ 缓冲液的配制
• 附录Ⅲ
• 作者简历
• 硕士期间发表的学术论文
• 致谢