毛细管电泳技术在二陈汤指纹图谱研究和植物细胞单细胞分析中的应用

论文摘要

目的:研究毛细管电泳技术在中医药现代化研究中的应用,论文分为两部分研究内容:1.研究毛细管电泳技术在中药指纹图谱研究的应用,建立二陈汤毛细管电泳指纹图谱分析方法。2.研究毛细管电泳单细胞分析技术和激光诱导荧光检测技术在植物细胞单细胞分析中的应用,实现单个小麦胚性细胞内氨基酸的分析。方法:1.利用毛细管电泳技术对《局方》二陈汤的水煎液进行分析。分离缓冲液:选用35mmol/L硼砂（加乙腈浓度至10%）为运行缓冲液（pH 9.0）。用二极管阵列检测器对谱图在190nm～300nm进行全扫描得三维光谱图,确定最佳检测波长为200nm。换用紫外检测器对二陈汤供试品进行检测,CE条件为:分析运行电压:25kV,极性从正极到负极;毛细管卡盒温度:25oC;压力进样:0.5psi×5s。2.运用毛细管电泳激光诱导荧光检测技术对单个小麦胚性细胞的氨基酸进行检测。利用电穿孔技术将荧光素FITC引入到活的原生质中进行细胞内的衍生。在细胞内的衍生反应完成后,进行CE-LIF检测。分离缓冲液:25×10-2 mol/L硼砂/1.25×10-2 mol/L NaOH-1.20×10-4 mol/L精胺（pH 9.45）。CE条件为:分析运行电压:25kV,极性从正极到负极:毛细管卡盒温度:25oC。结果:1.确定了二陈汤水煎液电泳分析的最佳缓冲液和最佳电泳条件,初步建立了二陈汤的指纹图谱,在一个电泳条件下实现了全方中20多个峰的分离,方法上也具有较好的重现性和稳定性。2.采用电穿孔方法将衍生试剂强制导入小麦细胞中,使氨基酸的衍生反应在细胞内进行,这能够有效得减小细胞内样品的稀释。结合LIF检测的高灵敏度实现了植物细胞内组分的分析。单个小麦胚性细胞中10种氨基酸得到了较为理想的分离。结论:毛细管电泳法具有分离模式多、分离效率高、速度快、使用范围广、所需样品量和试剂量少、可直接分析水溶液等特点,在中药指纹图谱分析和植物细胞单细胞分析中显示了其优越性。可以预见,毛细管电泳技术在中医药现代化研究中将有非常广阔的前景。

论文目录

• 提要
• ABSTRACT
• 第一章 毛细管电泳技术的原理与发展概述
• 1 技术原理
• 2 发展概述
• 2.1 毛细管电泳的分离模式
• 2.2 毛细管电泳的进样技术
• 2.3 毛细管电泳的检测方法
• 2.4 毛细管电泳的特点
• 3 前景展望
• 第二章 毛细管电泳技术在二陈汤指纹图谱研究中的应用
• 1 引言
• 1.1 中药指纹图谱的研究概况
• 1.2 高效毛细管电泳技术在中药指纹图谱研究中的应用
• 1.3 二陈汤的研究概况
• 1.4 本章研究内容
• 2 实验方法
• 2.1 药材、仪器与试剂
• 2.2 实验部分
• 3 结果和讨论
• 3.1 实验条件的选择
• 3.2 二陈汤指纹图谱
• 4 本章小结
• 第三章 毛细管电泳技术在植物细胞单细胞分析中的应用
• 1 引言
• 1.1 毛细管电泳单细胞分析技术
• 1.2 激光诱导荧光检测技术
• 1.3 本章研究内容
• 2 实验部分
• 2.1 仪器部分
• 2.2 材料和试剂
• 2.3 实验方法
• 3 结果和讨论
• 3.1 标准氨基酸的检测
• 3.2 小麦胚性细胞溶膜液的检测
• 3.3 单细胞氨基酸分析的检测
• 3.4 附图
• 4 本章小结
• 结语
• 参考文献
• 致谢
• 详细摘要