论文摘要
口腔白斑（oral leukoplakia，OLK）是口腔粘膜上的一种明显白色斑块，以临床和组织病理学的方法不能诊断为任何其他疾病的癌前病变，患病率为10.47％。组织学检查显示鳞状上皮单纯增生或／和异常增生。在临床上有相当比例（3％-5％）的癌变率，平均癌变病程达8.2年，其转变为鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）的风险比正常人高50-100倍。OSCC是口腔最常见的恶性肿瘤，占口腔颌面部恶性肿瘤的80％以上，占全身恶性肿瘤的3％-5％。由于从癌前病变发展到癌是一个循序渐进的变化过程，因此检测OLK的恶变潜能，探讨其与口腔鳞状细胞癌的发生、发展关系对于临床有重要的指导意义，受到学术界的广泛关注。肿瘤形成是一个十分复杂的过程，基因表达与调控、细胞增殖与凋亡及新血管生成等在肿瘤发生发展中的作用日益受到研究者们的关注。核转录因子（nuclear factorκgene binding，NF-κB）是1986年Sen等首次在成熟的B细胞发现的能与免疫球蛋白的κ轻链启动子κB序列特异结合的一种转录因子，可以诱导不同基因的表达，参与炎症反应，胚胎发育和抗凋亡，其主要成员为NF-κB1（p50），NF-κB2（p52），p65（RelA），Rel-B和c-Rel，二聚体p65和p50作为典型的NF-κB与它的抑制蛋白IκB（inhibitionκB）结合形成三聚体存在于胞浆。近年来研究发现NF-κB可以诱导多种靶基因的表达，细胞周期蛋白cyclin D1基因启动子上存在与NF-κB和生长因子结合的位点，NF-κB在G1期与其启动子κB位点结合后，可启动cyclin D1基因的转录表达，促进细胞增殖。实验证实NF-κB可诱导新生血管的生长，CD105（endoglin）是血管内皮细胞上可以结合转化生长因子β（TGFβ）的受体蛋白，CD105标记的微血管密度（microvessl density，MVD）主要在未成熟血管上表达。目前NF-κB／p65、cyclin D1和CD105在OLK到OSCC中表达的研究尚未见报道。目的本课题通过对NF-κB／p65，cyclin D1在OLK到OSCC中表达及与血管生成的关系进行研究，初步探讨它们在OLK癌变过程中的作用，为OLK癌变的早期诊断及判断预后提供依据，也为OSCC的临床治疗提供一种新的思路。材料和方法1．研究所用标本选自郑州大学第一附属医院1999年1月-2005年12月病理科：OLK标本48例，OSCC 37例。全部标本均经福尔马林固定，石蜡包埋，术前均未行放疗，化疗或者其它生物治疗。在OLK中，单纯增生型OLK12例，轻度异常增生型OLK13例，中度异常增生型OLK13例，重度异常增生型OLK10例；在OSCC中，根据细胞的分化程度分为Ⅰ级13例，Ⅱ级13例，Ⅲ级11例。10例正常口腔粘膜组织作为正常对照。2．应用PV-9000通用型两步法免疫组织化学技术对所有标本进行NF-κB／p65蛋白、cyclin D1蛋白和CD105染色，分别计算NF-κB／p65蛋白和cyclin D1蛋白阳性表达率，以CD105标记的MVD值检测其活性。3．应用SPSS11.0统计软件，采用t检验、秩和检验、χ2检验、Fisher’s精确概率法，相关分析采用Spearman等级相关分析。取α=0.05为显著性检验水准。结果1．NF-κB／p65蛋白的阳性表达主要位于细胞浆，极少量可见于细胞核，呈棕黄色颗粒，弥漫分布。在正常口腔粘膜和单纯增生型OLK在正常粘膜组织和单纯增生型OLK组织中NF-κB／p65蛋白几乎不表达，异常增生型OLK和OSCC中的阳性表达率分别为：41.67％和78.38％，四组间NF-κB／p65蛋白阳性表达率差异具有统计学意义（P=0.000），且蛋白染色程度相比差异具有统计学意义（P=0.001）。在OLK中NF-κB／p65蛋白染色程度随着细胞异常增生程度增加而染色逐渐增加，但差异无统计学意义（P=0.065），在OSCC中随着细胞分化降低染色程度逐渐增加，它们的差异有统计学意义（P=0.039）。2．cyclin D1蛋白阳性染色主要以细胞核为主，伴少许细胞浆，呈现棕黄色颗粒。在正常口腔粘膜组、单纯增生、异常增生型OLK组和OSCC组中，均发现cyclin D1表达，但表达强度不同，呈现一种动态变化：在正常口腔粘膜组织、在单纯增生型OLK、异常增生型OLK和OSCC中的阳性表达率分别为：20.00％、58.33％、72.22％和81.08％，四组间cyclin D1蛋白阳性表达率差异具有统计学意义（P=0.000），经Spearman相关分析蛋白染色程度相比差异有统计学意义（P=0.000）。但cyclin D1蛋白在异常增生型OLK组织中及OSCC中阳性表达率和染色强度亦无明显差异（P＞0.05）。3．CD105的表达主要定位于血管内皮细胞的细胞质。在正常组织、单纯增生性OLK、异常增生性OLK和OSCC中MVD分别为0.00±0.000、3.92±1.929、10.44±1.858和15.92±3.427。经统计学分析，四组间CD105／MVD的差别均有统计学意义（P＜0.05）。在OSCC中，高分化、中分化及低分化各组间CD105／MVD的差别均有统计学意义（P＜0.05）。4．在所有病例中，NF-κB／p65和cyclin D1蛋白同时阳性表达者占36.8％（35／95），同时阴性表达者占36.8％（35／95），经Spearman等级相关分析显示NF-κB／p65和cyclinD1蛋白的表达呈正相关rs=0.482（P＜0.05）。5．在所有病例中，NF-κB／p65蛋白阳性表达组的MVD（13.71±4.742）较NF-κB／p65蛋白阴性表达组的MVD（7.90±5.539）高，经t检验显示二者之间差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论1．NF-κB／p65蛋白与细胞的增殖密切相关，有助于评价OLK的恶变潜能，可作为口腔癌变监测的生物学指标之一。2．cyclin D1在OLK癌变过程中的动态变化，在正常粘膜上皮→上皮单纯增生→上皮异常增生→鳞癌的演变过程中cyclin D1呈现逐渐增高趋势，但在OSCC中出现下调现象，提示cyclin D1是口腔癌变过程中的早期事件。3．CD105标记的MVD在OLK癌变至OSCC过程中逐渐升高，且与OSCC组织分化程度密切相关。提示CD105／MVD是反映肿瘤血管形成过程中的可靠指标，对于判断OSCC的恶性程度有重要的参考价值。4．NF-κB／p65、cyclin D1蛋白在OLK癌变过程中密切相关，提示二者相互作用参与调节细胞的增殖，参与了OLK的癌变。NF-κB／p65蛋白阳性表达组的MVD较阴性表达组的高，提示NF-κB／p65参与口腔肿瘤血管的生成。5．联合检测NF-κB／p65、cyclin D1、CD105，有助于OLK癌变的早期诊断、治疗和预后判断。