茄呢醇提取工艺研究和益妙保尔金米胶囊抗肿瘤活性评价

论文摘要

【目的】1．建立茄呢醇的含量测定方法，对从烟叶中提取茄呢醇的工艺进行研究；2．评价益妙保尔金米胶囊的抗肿瘤活性及急性毒性。【方法】1．应用高效液相色谱法，采用DIKma C18色谱柱（150 mm×4.6mm，5μm），甲醇-异丙醇（52：48）作为流动相，流速：0.8 mL／min-1，检测波长为210 nm，进样量20μL，用标准曲线法测定茄呢醇的含量。2．以游离茄尼醇为指标，采用正交试验及比较试验，考虑提取溶剂、方法、时间等因素，对提取工序进行考察；以游离茄尼醇为指标，采用正交试验，考虑皂化物、溶剂、时间、浓度、温度、皂化溶液体积等因素，对皂化工序进行考察。3．采用改良MTT法，测定益妙保尔金米胶囊对小鼠结肠癌细胞株（CT-26）和胃癌细胞株（MFC）体外生长的抑制率，计算半数抑制浓度IC50；将40只CT-26结肠癌皮下接种模型小鼠和40只MFC胃癌皮下接种模型小鼠分别随机分成4组：阴性对照组（等体积生理盐水）、阳性对照组（香菇菌多糖片，0.5 mg／20g／日或康力欣胶囊，0.075g／20g／日）、低剂量组（益妙保尔金米胶囊粉末，0.0834g／20g／日）、高剂量组（益妙保尔金米胶囊粉末，0.2501 g／20g／日）。均采用接种5天后灌胃给药法，持续给药8天，停药24小时后，处死动物。剥离肿瘤，称重并计算抑瘤率；取出脾脏及胸腺，称重并计算脾指数及胸腺指数。【结果】1．方法学考察结果表明，茄呢醇的线性范围为0.56-2.80μg，相关系数r=0.9995，平均加样回收率100.2％（n=9），精密度RSD=1.19％；烟叶提取物中游离茄呢醇的含量在8％-12％之间。2．从烟叶中提取茄呢醇的提取、皂化工序工艺参数不同，茄呢醇收率相差极大，本实验所得较好的提取工艺为：10倍量的95％乙醇，50℃回流提取120分钟或超声波连续提取30分钟，较好的皂化条件为：在乙醇溶液中，以3倍量2.0 mol／L的NaOH为皂化试剂，60℃皂化4小时。3．益妙保尔金米胶囊无明显的抑制小鼠结肠癌细胞株（CT-26）和胃癌细胞株（MFC）体外生长的活性，对小鼠结肠癌细胞株（CT-26）和胃癌细胞株（MFC）体内生长显示出了明显的抑制作用，与生理盐水组比较，对小鼠结肠癌细胞株（CT-26）高剂量组的抑瘤率为30.26％，低剂量组的抑瘤率为25.74％，对小鼠胃癌细胞株（MFC）高剂量组的抑瘤率为29.35％，低剂量组的抑瘤率为20.53％。【结论】1．实验用茄呢醇含量测定方法具有良好的精密度、准确度和灵敏度，以此法测定游离茄呢醇的含量可行。2．益妙保尔金米胶囊粉末对小鼠结肠癌细胞株（CT-26）和胃癌细胞株（MFC）体内生长有一定的抑制作用，且无明显的量效关系。3．采取超声波提取可以大大提高原料的提取效率，从烟叶中提取茄呢醇，提取皂化工序工艺参数选择十分重要，应该进行深入研究。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 茄呢醇含量测定方法研究
• 1.1 引言
• 1.2 仪器和试剂
• 1.3 方法和结果
• 1.3.1 色谱条件
• 1.3.2 对照品溶液的制备
• 1.3.3 供试品溶液的制备
• 1.3.4 对照品含量测定
• 1.3.5 方法学考察
• 1.3.6 样品含量测定
• 1.4 小结与讨论
• 参考文献
• 第二章 从烟叶中提取茄呢醇的工艺研究
• 2.1 引言
• 2.2 仪器和试剂
• 2.3 方法和结果
• 2.3.1 指标成分茄呢醇含量测定方法的建立
• 2.3.2 提取工艺考察
• 2.3.3 皂化工艺考察
• 2.4 小结与讨论
• 参考文献
• 第三章 益妙保尔金米胶囊抗肿瘤的活性评价
• 3.1 引言
• 3.2 试剂与材料
• 3.2.1 供试品
• 3.2.2 受试细胞株
• 3.2.3 实验动物
• 3.2.4 实验材料
• 3.3 方法和结果
• 3.3.1 方法
• 3.3.2 结果
• 3.4 急性毒性实验
• 3.4.1 供试品和材料
• 3.4.2 方法和结果
• 3.5 讨论与小结
• 参考文献
• 第四章 单甲基斑蝥素提取分离
• 4.1 引言
• 4.2 化合物结构图
• 4.3 实验研究
• 4.3.1 仪器和材料
• 4.3.2 提取和分离
• 4.3.3 化合物结构鉴定
• 4.3.4 化合物的物理常数和波谱数据
• 4.4 小结与讨论
• 参考文献
• 10的应用及前景展望（综述）'>辅酶Q₁₀的应用及前景展望（综述）
• 前言
• 1.药理作用
• 2.应用
• 10的制备方法及目前生产状况'>3.辅酶Q₁₀的制备方法及目前生产状况
• 4.市场前景及存在的问题
• 参考文献
• 致谢
• 已发表和接受发表的文章