两个不同人工雌核发育草鱼群体基因组DNA的RAPD分析及金鱼vsx1基因结构分析

论文摘要

一.关于两个不同人工雌核发育草鱼群体基因组DNA的RAPD分析: 采用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对连续两代人工诱导雌核发育草鱼群体和一代人工诱导雌核发育草鱼群体的群体内的遗传相似度、遗传距离以及群体多样性进行了分析,并用一个随机取样的普通草鱼群体作比较。其中的一个雌核发育草鱼群体是经历了连续两代人工雌核发育的极体-有丝-雌核发育草鱼群体。另一个雌核发育草鱼群体是通过一次人工雌核发育所获得的有丝-雌核发育草鱼群体。普通草鱼群体随机取自长沙的农贸市场。 用26个多态性引物在三个群体中共检测到了291个扩增位点;在三个群体中检测到的位点数分别为265、272和282。其中多态性位点数分别为15、19和81。遗传学统计分析结果表明:三个群体的多态位点比例分别为5.66%、6.99%、28.72%;香农表型多样性指数分别为0.1702、0.3169和0.8450;按照Nei指数统计的三个群体的遗传相似度分别为0.9851、0.9820、0.9114。这些结果表明:两个雌核发育草鱼群体的遗传多样性远低于普通草鱼群体,而其群体的基因组DNA同质性远高于普通草鱼。而在两个雌核发育草鱼群体中,两代雌核发育群体的遗传多样性要低于一代雌核发育群体的遗传多样性;而群体的遗传纯合度则前者高于后者。 二、金鱼vsx1基因基因组结构分析: vsx1基因编码的蛋白具有一个paired-like的同源异型域和CVC域,是与眼睛早期发育相关的重要基因,对视网膜前体细胞的增殖,杆状和椎体双极细胞的特化、分化以及分化状态的维持具有重要作要。本研究以金鱼为材料,分离和克隆了金鱼的vsx1基因,分析了其基因的结构,确定了vsx1基因的碱基序列及其5′端部分序列,为进一步深入研究vsx1基因的功能创造了条件。 根据已知的vsx1基因的5′端部分序列,设计三个嵌套式的基因特异引物（GSP）,与不同的任意一个随机引物组合作为TAIL-PCR反应的引物,提取金鱼尾鳍的基因组DNA用作聚合酶链式反应（PCR）

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 两个不同人工雌核发育草鱼群体基因组DNA的RAPD分析
• 1.引言和文献综述
• 1.1 鱼类人工雌核发育
• 1.2 RAPD分子标记原理及其在研究中的应用
• 2.材料和方法
• 2.1 实验材料和试剂
• 2.2 实验方法
• 3.实验结果
• 3.1 模板DNA的检测
• 3.2 3个草鱼群体DNA的RAPD扩增
• 3.3 多态位点比例
• 3.4 香农遗传多样性指数
• 3.5 3个草鱼群体的群体内遗传相似度和遗传距离
• 4.讨论
• 4.1 关于基因组DNA对RAPD扩增的影响
• 4.2 关于RAPD反应条件及扩增产物的重复性
• 4.3 关于弱带的处理
• 4.4 关于群体内和群体间遗传多样性
• 第二章 金鱼vsx1基因基因组结构分析
• 1.引言和文献综述
• 1.1 基因表达的二倍体依赖型机制
• 1.2 与眼睛发育相关的vsx1基因
• 1.3 用于克隆5′侧翼序列的实验技术
• 1.4 ZAIL-PCR的原理及其应用
• 2.材料和方法
• 2.1 实验材料、试剂、仪器设备和耗材
• 2.2 引物
• 2.3 实验方法
• 3.结果与分析
• 3.1 金鱼成体尾鳍基因组DNA质量检测
• 3.2 金鱼vsx1基因5′上游侧翼序列的TAIL-PCR扩增、扩增产物的直接测序及其克隆
• 3.3 vsx1基因的PCR扩增以及扩增产物的克隆
• 3.4 重组质粒的鉴定、测序
• 3.5 序列的分析
• 3.6 金鱼vsx1基因结构及金鱼vsx1基因与其它物种vsx1基因的同源性分析
• 4.讨论
• 4.1 关于模板DNA的要求
• 4.2 关于PCR产物与T载体的连接
• 4.3 关于ZAIL-PCR的扩增反应
• 4.4 3个片段（Fa3、Fb3、Fd3）的分析
• 4.5 金鱼vsx1的基因结构特点以及各物种的vsx1的同源性
• 结语
• 参考文献
• 附录
• 致谢
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