论文摘要
目的：分析沙利度胺对黑色素瘤微循环模式形成、肿瘤细胞增殖活性以及肿瘤侵袭转移相关蛋白表达的影响，阐述沙利度胺抑制黑色素瘤生长相关分子机制，为临床治疗黑色素瘤提供思路和实验依据。方法：C57小鼠35只，随机分为实验组和对照组（实验组20只，对照组15只），鼠鼷部注射B16黑色素瘤细胞悬液1×106／ml 0.2ml建立荷瘤小鼠模型。由于沙利度胺水溶性差，将其溶解于0.5％羧甲基纤维素钠（sodium carboxylmethyl cellulose，CMC）溶液中。于接种后第5天开始给药，实验组每日给予200mg／kg沙利度胺0.2 ml灌胃，对照组相同方法给予等量0.5％CMC。持续12天，每天测量肿瘤直径，计算肿瘤体积，接种后第17天处死全部实验组和对照组小鼠，剥离肿瘤。将肿瘤组织沿最大面剖开，10％福尔马林固定并进行HE染色，进行形态学观察。免疫组织化学染色观察药物对MMP-2、MMP-9、VEGF、NF-κB和PCNA表达的影响。计数方法如下：避开坏死组织，选择有代表性的10个高倍视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，取其阳性细胞均数来评价整张切片的染色状况。肿瘤微循环模式计数方法如下：随机选择10个高倍视野，进行内皮依赖性血管、马赛克血管（mosaic vessel，MV）和血管生成拟态（vasculogemc mimicry，VM）计数并取均值，观察沙利度胺对肿瘤微循环的影响。肿瘤细胞坏死情况的计数方法如下：选择有代表性的10个高倍视野，每个视野计数100个肿瘤细胞中的坏死细胞数，取坏死细胞均数来计数整张切片的坏死状况。应用SPSS for Windows 10.0统计软件包对数据进行方差分析及t检验，以P＜0.05为有统计学意义标准。结果：肿瘤生长早期实验组和对照组肿瘤生长体积差异不明显，在肿瘤生长后期实验组小鼠的肿瘤体积明显小于对照组，两者差异有统计学意义（P＜0.05）。统计学分析结果表明实验组内皮依赖性血管、马赛克血管和血管生成拟态数目与对照组相比显著降低（P＜0.05），且实验组肿瘤组织中VEGF、NF-κB、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达也明显低于对照组（P＜0.05）。实验组肿瘤组织中出现较多的坏死，坏死细胞数明显高于对照组（P＜0.05）。结论：沙利度胺可以抑制B16黑色素瘤C57小鼠移植瘤的生长，其作用机制主要包括以下两方面：（1）沙利度胺可下调VEGF、NF-κB、MMP-2及MMP-9的表达，抑制内皮依赖性血管、马赛克血管和血管生成拟态的生成。VEGF、NF-κB、MMP-2及MMP-9均是肿瘤血管生成的诱导因子，促进肿瘤的血管生成。沙利度胺通过下调VEGF、NF-κB、MMP-2及MMP-9的表达，可抑制黑色素瘤中内皮依赖性血管、马赛克血管和血管生成拟态的生成。（2）沙利度胺下调肿瘤细胞PCNA的表达，抑制黑色素瘤细胞的增殖活性，促进肿瘤细胞的坏死，其机理可能与氧毒性物质ROS的生成有关。总之，沙利度胺可促进肿瘤细胞坏死，下调VEGF、NF-κB、MMP-2及MMP-9的表达和肿瘤细胞的增殖活性，抑制内皮依赖性血管、马赛克血管和血管生成拟态的生成，影响黑色素瘤的血液供应，抑制肿瘤的生长。