论文摘要
目的:利用生物信息学分析hgACE抗原表位,制备抗hgACE的多克隆抗体,为hgACE的功能研究提供实验室基础。方法:1.利用在线资源ExPASy（ http://www.expasy.org/tools ）、TMHMM（http: //www.cbs.dtu.dk./services/TMHMM）、protparam （ http://www.expasy.o rg/cgi-bin/proparam ）、protscale （ http://www.expasy.org/cgi-bin/pro tscale ）、sppider（ http://www.sppider.cchmc.org/sppiderdoc.html）、SOPMA以及DNAstar（protean）生物信息学软件对hgACE的氨基酸序列分析,预测该蛋白的亲水性、抗原性、表面可及性、可塑性、二级结构以及跨膜结构,经同源性检索后,综合考虑抗体设计的基本原则,选取具有抗原性的多肽段。2.化学合成抗原多肽与钥孔戚血蓝素（keyhole limpet hemocyanin,KLH）偶联,免疫家兔制备多克隆抗体。3.间接ELISA方法测定抗体效价,Western blot鉴定其特异性以及免疫组织化学方法对精子表面的gACE定位。结果:（1）成功选取了具有抗原性的多肽表位,其序列为第281-291位氨基酸（YVRRALHRHYG）。（2）制备了抗hgACE的多克隆抗体。（3）ELISA测定抗体效价1:16000;Western blot证实,hgACE多克隆抗体与重组的hgACE抗原能够特异性结合;免疫组织化学染色证实利用该抗体对人精子表面gACE定位,其结果与文献报道一致。结论:利用生物信息学软件较好地预测出hgACE的抗原表位,并成功制备了高效价、高特异性的hgACE多克隆抗体。
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