论文摘要
自身免疫性甲状腺疾病（autoimmune thyroid disease,AITD）是一组发病机制复杂的器官特异性自身免疫疾病。人促甲状腺激素受体（hTSHR）是AITD的主要靶抗原,在AITD的发病中起重要作用。hTSHR基因定位于14号染色体（14q31）上,是一种G蛋白偶联受体,为大分子糖蛋白其肽链可分为膜外区,跨膜区和膜内区。TSHR膜外区（TSHR-ecd）为促甲状腺激素（TSH）或TSHR抗体（TRAb）识别及结合部位,有广泛的、多个不连续的结合位点。其中TSHR刺激型抗体（TSAb）的抗原决定簇存在于膜外区的N端（氨基酸3437,40,4245,5256）,TSHR刺激阻断型抗体（TSBAb）的抗原决定簇存在于膜外区的C端（氨基酸301,385,390）,而这些区域也都是TSH的结合位点。TSH主要作用的靶器官是甲状腺,它是通过与甲状腺细胞膜上的TSH受体TSHR结合,通过CAMP第二信号系统引起一系列生物学反应,促进甲状腺激素的分泌,提高甲状腺的摄碘能力并促进甲状腺激素的合成、释放,对甲状腺组织的生长、分化等起着非常重要的作用。TSHR属甲状腺的正常组分,但是,遗传因素的存在和免疫因素、环境因素的诱发,引起了hTSHR的变异,使其产生了抗原性,致TSHR特异性免疫原肽得以暴露,破坏了人体对TSHR的耐受性,产生大量的TRAb,引发免疫应答而致病。TRAb的检测在AITD的科研及临床中有着极其重要的意义。目的以本室制备富含TSAb抗原决定簇的重组TrxTSHRn蛋白、富含TSBAb抗原决定簇的重组TrxTSHRc蛋白分别作为抗原,酶联免疫吸附（ELISA）检测人血清TRAb（包括TSAb、TSBAb）含量,探讨此TRAb检测在AITD诊断和治疗中的意义。方法取本室研制的重组TrxTSHRn、TrxTSHRc蛋白为抗原,通过不同的抗原包被量、不同的血清稀释度优化,建立TSAb、TSBAb的间接ELISA检测方法。经精密度测试后,用于检测不同年龄、性别组健康人群,及各甲状腺疾病患者血清中的TRAb。结果1.以TrxTSHRc蛋白为抗原TRAb检测,抗原包被量16ng/100μl、待测血清稀释100倍时阳性和阴性血清OD405分别为1.325和0.358,批内变异cv%为3.77%和3.42%,批间变异cv%为4.87%和5.12%,正常人中OD405值为0.319±0.107,正常值范围为0.105～0.533,正常人组阳性率3.30%（9/272）;Hashimoto甲状腺炎患者阳性率66.01%（336/509）,其中伴甲状腺功能减退者阳性率77.78%（252/324）、伴甲状腺功能亢进者52.94%（63/119）、甲功正常者31.82%（21/66）;初发Graves’患者阳性率41.86%（44/105）;治疗1年Graves’患者阳性率17.86%（5/28）;单纯性甲状腺肿患者阳性率6.98%（3/43）;亚急性甲状腺炎患者阳性率11.1%（5/45）;非毒性结节性甲状腺肿患者阳性率8.70%（6/69）;甲状腺腺瘤患者阳性率3.2%（1/31）。2.以TrxTSHRn蛋白为抗原TRAb检测,抗原包被量100ng/100μl、待测血清稀释100倍时阳性和阴性血清OD405分别为1.098和0.410,批内变异为3.53%和4.12%,批间变异为4.52%和4.67%,正常人群中儿童组共115例（0至14岁,平均3.8岁）OD405为0.186±0.094,正常成人组1060例（18至81岁）OD405值为0.398±0.167,二者差异有统计学意义,性别组之间及成人组各年龄段之间差异无统计学意义。成人组正常值范围0.064～0.732,阳性率2.45%（26/1060）、初发Graves’患者阳性率70.31%（74/105）、治疗1年Graves’患者阳性率35.7%（10/28）、Hashimoto甲状腺炎患者阳性率36.67%（44/120）、单纯性甲状腺肿患者阳性率4.6%（2/43）、亚急性甲状腺炎患者阳性率6.67%（3/45）、非毒性结节性甲状腺肿患者阳性率7.25%（5/69）。结论1.以TrxTSHRc蛋白为抗原ELISA法检测TRAb对AITD,尤其是Hashimoto甲状腺炎伴甲减的诊断中有重要意义。2.以TrxTSHRn蛋白为抗原ELISA法检测TRAb值范围在儿童组,成人年组存在差异,有统计学意义,在男、女性别组差异无统计学意义。3.以TrxTSHRn蛋白为抗原ELISA法检测TRAb对AITD,尤其是Graves’病的诊断中有重要意义。
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