论文摘要
γ干扰素（Interferon-γ,IFN-γ）又称免疫干扰素（Immune interferon）,是由淋巴细胞分泌的一类功能调节蛋白。除具有抗病毒、抗肿瘤的作用外,它还是人体内一种双向免疫调节因子,在治疗自身免疫性疾病方面有广阔的应用前景。天然人γ干扰素（hlFN-γ）来源有限、产量甚微,不能满足科研和临床应用的需要。因此,利用基因工程方法获得高表达的重组人γ干扰素（rhlFN-γ）成为国内外学者研究的热点。 本文依据遗传密码具有简并性的特点,在不改变氨基酸顺序的条件下,用大肠杆菌基因序列中使用频率高的强密码子取代hlFN-γ基因编码序列中的弱密码子,并将修改后的编码序列分为六段,进行人工化学合成。利用PCR技术扩增出目的基因后,将其克隆到表达载体pBV220上,进而转化入E.coli JM109中进行诱导表达。经SDS-PAGE和Western Blotting检测证实,表达产物的分子量约为18KD,与预期相符。通过优化表达条件,可提高目的蛋白表达产量,使其占菌体总蛋白的39.9%。重组蛋白rhlFN-γ主要存在于E.coli JM109的包涵体中,纯化时将其自包涵体中溶出后,采用分步稀释的方法进行复性。梯度透析后获得的rhlFN-γ样品委托中国药品生物制品检定所对其抗病毒活性进行测定,其活性效价为5.6×103IU/ml,比活性为2.8×104IU/mg。
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