论文摘要
[目的]结合能肯定LOX介导联苯胺氧化反应的体外酶系统实验与联苯胺对HBE细胞5—LOX蛋白表达和细胞DNA损伤的影响的细胞实验研究，初步探讨细胞内5—LOX对外源化合物的代谢情况，试图为LOX作为细胞色素P450氧化代谢外源化合物的替代途径提供进一步的依据。[方法]体外酶系统实验：在适宜条件下，大豆脂氧合酶（SLO）与联苯胺（BZ）等在酶体系中开始反应后，用分光光度法在特定波长检测反应体系中反应产物及自由基中间产物的生成情况，计算SLO对联苯胺氧化代谢速率和EGCG对代谢的抑制率。细胞实验：分别以不同浓度的联苯胺染毒HBE细胞24小时，然后用western-blot印记法检测各组5—LOX蛋白表达的情况；同时用单细胞凝胶电泳实验检测各组的DNA损伤情况。最后检测特异性5—LOX抑制剂（AA861）对5—LOX蛋白表达和对DNA损伤的影响。[结果]在过氧化氢参与下，SLO可以协同氧化联苯胺，氧化后生成联苯胺二亚胺。SLO介导BZ氧化的Vmax值为1.42nmol·min-1·nmol-1SLO，BZ的Km值为1.48mmol·L-1。天然黄酮类化合物EGCG可抑制该协同氧化作用，且在一定范围内呈剂量效应关系。联苯胺可以使HBE细胞内5—LOX蛋白表达增加，AA861对5—LOX蛋白表达没有影响；联苯胺可以使HBE产生明显的DNA损伤，AA861可以明显抑制DNA损伤情况。[结论]在过氧化氢参与下，SLO可以介导联苯胺协同氧化，EGCG可以抑制该协同氧化作用。5—LOX在HBE细胞内的蛋白表达是可以经联苯胺调节的，特异性5—LOX抑制剂AA861对其蛋白表达无明显影响。HBE细胞内的5—LOX可能通过介导联苯胺协同氧化，产生亲电子自由基与DNA结合，使HBE细胞产生DNA损伤，AA861可以明显抑制该反应。