丹参酮ⅡA对小鼠永久性局灶脑缺血的保护作用

论文摘要

脑缺血是危害人类健康的严重疾病,已经成为继心脏疾病之后世界第二大致死因素。虽然目前关于脑缺血的研究已经越来越受到重视,但是脑缺血的治疗药物仍然非常缺乏。丹参是常用的活血化瘀中药,被广泛地应用于心脑血管疾病的治疗。丹参酮ⅡA（TSA）是丹参主要的脂溶性活性成分之一,近年来已有报道证明TSA对一过性脑缺血有很好的治疗效果,但其对于永久性脑缺血的作用及保护机制仍然未知。本实验目的在于研究TSA是否对小鼠永久性局灶性脑缺血损伤具有保护作用,并探讨其可能的作用机制。本实验共分为两个部分,第一部分通过整体模型评价TSA对小鼠永久性局灶性脑缺血的治疗效果。第二部分从体内和体外两方面入手,探讨TSA可能的作用机制。方法:动物主要分5个组:假手术组、模型组、TSA高剂量组（20mg/kg）,TSA中剂量组（10mg/kg）,TSA低剂量组（5mg/kg）。另外第一部分药效实验还添加了尼莫地平阳性对照组。实验采用永久性中动脉栓塞法造模（pMCAO）,造模后24小时取材,通过行为学指标以及梗死面积评价脑损伤程度;生化检测用于测定血清中SOD活性、MDA含量以及脑组织匀浆中iNOS活性、NO含量;免疫组化用于检测脑冰冻切片中iNOS的表达情况。体外实验分5组:正常对照组、模型组、TSA高剂量组（8μM）、TSA中剂量组（4μM）、TSA低剂量组（2μM）,采用过氧化氢损伤模型对星形胶质细胞进行研究。通过细胞存活率、细胞上清中的NO含量以及NF-κB的转录来进一步探讨TSA可能的作用机制。结果:TSA高、中剂量组均可显著减少梗死面积（P＜0.01）;在行为学方面,20mg/kgTSA给药组自缺血后8h起可显著缓解行为学症状（P＜0.05）,其余剂量组行为学指标相对于模型组均有不同程度的改善。TSA高、中剂量组小鼠血清中的MDA含量显著下降,SOD含量显著提高,脑组织匀浆中NO含量明显下降（P＜0.01,0.05）;三个药物剂量组均能显著降低脑组织匀浆中iNOS活性（P＜0.01）,免疫组化结果同时显示,缺血半球iNOS表达被抑制。体外实验中,三个TSA干预组（2,4and 8μM）均能显著减轻H2O2造成的星形胶质细胞损伤,并减少由此诱导产生的NO（P＜0.01）;免疫印记实验证明NF-κB的转录也被抑制。结论:TSA对小鼠永久性脑缺血损伤有一定的保护作用。这一保护作用可能由于TSA可以减少受损组织的ROS含量,减轻氧化应激损伤;进而抑制ROS下游炎症因子iNOS的表达来减少NO的产生,从而缓解脑缺血后的炎症损伤。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 丹参酮ⅡA的神经保护作用
• 1.1 绪论
• 1.2 仪器与试剂
• 1.2.1 仪器
• 1.2.2 试剂
• 1.2.3 动物与药物
• 1.3 分组
• 1.3.1 试剂与药物配制
• 1.3.2 动物分组及给药
• 1.4 方法
• 1.4.1 动物模型制备
• 1.4.2 神经行为学评分
• 1.4.3 梗死面积测定
• 1.4.4 统计学分析
• 1.5 结果
• 1.5.1 梗死面积
• 1.5.2 神经行为学评分
• 1.6 讨论
• 第二章 丹参酮ⅡA治疗脑缺血的作用机制研究
• 2.1 绪论
• 2.2 仪器与材料
• 2.2.1 仪器
• 2.2.2 试剂
• 2.2.3 动物与药物
• 2.3 分组
• 2.3.1 试剂与药物配制
• 2.3.2 分组及给药
• 2.4 方法
• 2.4.1 模型制备
• 2.4.2 血清及组织样本制备
• 2.4.3 脑组织冰冻切片制备
• 2.4.4 生化检测
• 2.4.5 免疫组化
• 2.4.6 星形胶质细胞培养
• 2.4.7 MTT检测及细胞上清NO含量测定
• 2.4.8 蛋白提取
• 2.4.9 免疫印记
• 2.4.10 统计学分析
• 2.5 结果
• 2.5.1 血清中MDA含量及SOD活性
• 2.5.2 脑组织中NO含量
• 2.5.3 一氧化氮合酶活性及表达
• 2O₂损伤后星形胶质细胞存活率'>2.5.4 H₂O₂损伤后星形胶质细胞存活率
• 2O₂损伤后星形胶质细胞产生NO情况'>2.5.5 H₂O₂损伤后星形胶质细胞产生NO情况
• 2O₂损伤后星形胶质细胞NF-κB的转录'>2.5.6 H₂O₂损伤后星形胶质细胞NF-κB的转录
• 2.6 讨论
• 参考文献
• 致谢
• 综述-脑缺血过程中的氧化应激损伤