survivin基因为靶向的RNA干扰治疗上皮性卵巢癌的体外实验研究

论文摘要

目 的: 检测上皮性卵巢癌细胞SKOV3及其耐药株SKOV3/ADM中的survivin基因表达水平,探讨 survivin 基因在上皮性卵巢癌细胞中表达的意义。 方 法: 1.培养卵巢癌细胞 SKOV3 及其耐药株 SKOV3/ADM。 2.半定量 RT-PCR 检测 survivin mRNA 在两个细胞株内的转录水平。 3.Western blot 及免疫荧光抗体法检测 survivin 基因蛋白质的表达水平。 结 果: 1.半定量 RT-PCR 检测 survivin 基因 mRNA 在细胞株 SKOV3、SKOV3/ADM 中表达率分别为 75.3%、99.1%。 2.Western blot 检测 survivin 基因蛋白质在 SKOV3 及 SKOV3/ADM 中表达率分别为 70.3%、99.8%。 3.免疫荧光计数SKOV3、SKOV3/ADM免疫荧光细胞数分别为41.64±3.42,59.34±5.39,两组之间比较有统计学差异（P<0.05）。 结 论: survivin 基因在上皮性卵巢癌细胞 SKOV3 及 SKOV3/ADM 中均高表达,耐药细胞株中的表达高于亲本株中的表达。提示 survivin 基因与上皮性卵巢癌的发生发展密切相关,是导致卵巢癌化疗耐药的关键因素之一。重庆医科大学硕士研究生学位论文 5第二部分RNA 干扰沉默卵巢癌细胞 SKOV3 及其耐药株 SKOV3/ADM 中survivin 基因表达诱导细胞凋亡的研究目 的:应用 RNAi 技术研究重组质粒 pshRNA-survivin 对卵巢癌细胞 SKOV3 及其耐药株 SKOV3/ADM 中 survivin 基因表达水平的抑制情况,探讨重组质粒作用于卵巢癌细胞后,对细胞 SKOV3 及 SKOV3/ADM 凋亡活性的影响。方 法:1.重组质粒 pshRNA-survivin 以脂质体转染至细胞 SKOV3 及 SKOV3/ADM。2.分别用半定量 RT-PCR、 Western blot 检测干扰前后细胞内 survivin 基因mRNA 转录水平和蛋白质表达水平的变化。3.AO-EB 染色法、TUNEL 及 FCM 检测重组质粒诱导细胞凋亡的情况。结 果:1.RNAi 后,细胞 SKOV3、SKOV3/ADM 中 survivin 基因 mRNA 拷贝数明显减少,抑制率为 83.79%及 91.56 % 。蛋白质表达水平亦显著降低,抑制率为 85.32%、91.65%。2.AO-EB 染色法检测 SKOV3 细胞 RNAi 前后,细胞凋亡率分别为 3.56±0.59 个、53.00±4.23 个,具有显著统计学差异（P<0.05）;SKOV3/ADM 细胞 RNAi 前后, 细胞凋亡率分别为 4.31±0.48 个、68.00±5.49 个,两组具有显著统计学差异（P<0.05）。3.TUNEL 法检测 SKOV3 细胞 RNAi 前后细胞凋亡率分别为 6.34±0.87 个5、1.30±5.21个S,KOV3/ADM细胞RNAi前后凋亡细胞率分别为对照组7.42±0.76个5、.29±6.38 个。SKOV3、SKOV3/ADM 在 pshRNA-survivin 干扰后细胞凋亡率与干扰前相比较均具有显著统计学差异（P<0.05）。重庆医科大学硕士研究生学位论文 64.定量流式细胞仪检测结果显示 RNAi 后 48 h SKOV3、SKOV3/ADM 细胞凋亡率分别为 14.05%、21.02%,而在对照组未检测到明显的细胞凋亡。结 论:重组质粒 pshRNA-survivin 可明显抑制 SKOV3 及 SKOV3/ADM 细胞内 survivin基因 mRNA 的转录和蛋白质的表达,显著上调了细胞的凋亡活性,有效介导了卵巢癌细胞凋亡。关键词: RNA 干扰, survivin 基因, 卵巢肿瘤 第三部分RNA 干扰沉默 survivin 基因逆转上皮性卵巢癌化疗耐药性的研究目 的:进一步探讨 RNAi 沉默 survivin 基因的表达是否能有效上调卵巢癌耐药细胞SKOV3/ADM 对化疗药物的敏感性,逆转上皮性卵巢癌化疗耐药性。方 法:1.重组质粒及化疗药物紫杉醇作用于细胞。2.AO-EB 染色法、TUNEL 及 FCM 分析细胞凋亡情况。结 果: 1.AO-EB 法检测,脂质体转染组、紫杉醇作用组、RNAi 组、RNAi 联合紫杉醇组细胞凋亡率分别为 3.56±0.59 个、10.2±1.04 个、48.5±4.89 个、71.5±6.78

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 survivin 基因在卵巢癌细胞SKOV3 及SKOV3
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 RNA 干扰沉默卵巢癌细胞SKOV3 及 SKOV3/ADM中survivin基因表达诱导细胞凋亡的研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第三部分 RNA 干扰沉默survivin 基因逆转上皮性卵巢癌耐药性的研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 总结
• 综述
• survivin 基因表达与妇科肿瘤关系的研究进展
• 表达特异性survivin 基因与肿瘤免疫治疗的研究进展
• 致谢
• 攻读硕士期间发表论文情况