四物汤类方治疗妇科血瘀证的物质基础与配伍规律研究 ——少腹逐瘀汤及其组方药材的效应物质基础研究

论文摘要

论文共分四章开展对少腹逐瘀汤及其组方药材的效应物质基础研究。第一章文献综述部分,介绍了中国传统医学、现代医学对原发性痛经的认识,以及寒凝血瘀原发性痛经的中医药治疗概况,并对少腹逐瘀汤及其组方药材的临床应用以及化学、药理研究进展进行综述。实验研究部分分为两个主要研究内容,一是少腹逐瘀汤全方的研究,二是少腹逐瘀汤组方药材的研究。具体研究内容和结论如下:第二章以少腹逐瘀汤临床传统用药方式——汤剂为研究对象,采用水煎煮的方法进行提取,并采用大孔吸附树脂技术、膜分离技术等现代分离手段进一步分离富集,最后获得18个极性不同的样品供效应评价和化学分析用。选择与痛经有关的两个效应评价模型:离体器官模型（离体子宫收缩模型）和体外筛选模型（血小板聚集等）,从不同的角度对少腹逐瘀汤及其不同分离部位进行生物效应评价。1.小鼠离体子宫收缩试验结果表明,少腹逐瘀汤挥发油部位（SF-1）、少腹逐瘀汤水煎液部位（SF-2）、醇沉上清液部位（SF-5）、大孔树脂吸附后40%乙醇洗脱部位（SF-14）、60%乙醇洗脱部位（SF-13）均呈现出对子宫收缩的显著抑制活性;而沉淀部分（生物大分子物质）中相对分子质量小于5kD部位（SF-19）则对小鼠离体子宫收缩呈现兴奋作用。2.体外抑制ADP诱导的血小板聚集试验表明,少腹逐瘀汤经大孔树脂吸附后10%～40%乙醇洗脱部位（SF-9～SF-11）具有显著抑制ADP诱导的血小板聚集的活性（P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001）,其中40%乙醇洗脱部位（SF-11）活性最强（P＜0.001）。3.采用薄层色谱法、高效液相色谱法、液-质联用技术等现代分析手段对少腹逐瘀汤主要效应部位（SF-11）进行分析研究。通过标准品对照,质谱解析确定了40%乙醇洗脱部位（SF-11）中7个化学成分,分别为香草酸、咖啡酸、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、香蒲新苷、异鼠李素-3-0-新橙皮苷。采用HPLC-DAD法建立了少腹逐瘀汤主要效应部位中7个主要成分的含量测定方法,结果测得香草酸、咖啡酸、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、香蒲新苷、异鼠李素-3-0-新橙皮苷的含量分别为:1.28%、0.24%、0.71%、0.23%、12.05%、2.00%、2.98%,为少腹逐瘀汤及有效部位的复杂效应物质的阐明及质量控制提供依据。第三章少腹逐瘀汤组方药材挥发油部位生物效应及成分分析。1.选择离体子宫收缩模型对少腹逐瘀汤组方药材挥发油进行效应评价,试验结果表明等生药剂量下少腹逐瘀汤组方药材挥发油对小鼠离体子宫收缩均有不同程度的抑制活性,比较ED50以及95%可信限值可以看出,组方药材挥发油的活性强弱依次为:川芎油＞当归油＞小茴香油＞肉桂油＞干姜油,且组方药材挥发油的活性均强于少腹逐瘀汤挥发油。2.采用GC-MS联用技术对少腹逐瘀汤及其组方挥发油的化学成分进行了分析,鉴定了挥发油中的大部分成分,并通过比较挥发油总离子流图,认为少腹逐瘀汤挥发油低沸点成分主要来自于肉桂、干姜、小茴香,而高沸点成分主要来自于当归、川芎,且组方药材挥发油与复方挥发油中的主要成分有较大差异。3.采用体外抑制ADP诱导的血小板聚集模型对肉桂挥发油进行了进一步的效应评价,血小板聚集试验结果显示,肉桂油、肉桂醛对ADP诱导的血小板聚集有显著的抑制作用。4.采用小鼠离体子宫收缩模型、芳香化酶抑制剂体外筛选模型评价没药挥发油的生物效应;采用GC-MS联用技术对没药挥发性成分进行分离分析、鉴定。小鼠离体子宫平滑肌收缩实验表明,没药挥发油具有显著的抑制子宫收缩活性,并呈现良好的剂量依赖关系。芳香化酶抑制剂体外筛选实验结果表明,没药挥发油具有明显的抑制芳香化酶活性,并呈现出一定的剂量依赖趋势。5.采用硅胶柱层析对没药二氯甲烷萃取部位进行了分离,并鉴定了4个化合物。第四章研究工作总结与展望。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一章 文献综述
• 第一节 原发性痛经的理论概述
• 第二节 少腹逐瘀汤的研究概况
• 第二章 少腹逐瘀汤的效应物质基础研究
• 第一节 少腹逐瘀汤不同部位的分离
• 第二节 少腹逐瘀汤各分离部位的效应评价
• 第四节 少腹逐瘀汤主要效应部位化学成分分析
• 本章小结
• 第三章 少腹逐瘀汤组方药材的效应物质基础研究
• 第一节 少腹逐瘀汤组方药材挥发油对小鼠离体子宫收缩的影响
• 第二节 少腹逐瘀汤及其组方药材挥发性成分GC-MS分析与比较
• 第三节 肉桂挥发油对体外ADP诱导的血小板聚集的影响
• 第四节 没药挥发油抑制小鼠离体子宫平滑肌收缩及芳香化酶活性的效应评价及其成分分析
• 第五节 没药二氯甲烷部位化学成分研究
• 本章小结
• 第四章 工作总结与展望
• 一、工作总结
• 二、主要创新点
• 三、展望
• 致谢
• 参考文献
• 读研期间发表课题相关论文