三种浆果色素抗氧化及对肿瘤细胞抑制作用的研究

论文摘要

天然色素资源丰富、安全性高、无毒副作用,具有抗氧化、清除自由基、抗肿瘤、抗突变等多种生理活性。本文以三种东北野生浆果（笃斯越橘、紫叶稠李、山桃稠李）为原料,比较研究了三种浆果色素水提物和醇提物的体外抗氧化能力,对三种浆果色素纯化后的体外抗氧化能力与Vc进行了对比,并且将三种浆果色素提取物纯化后作用于肿瘤细胞,研究其对肿瘤细胞的抑制作用。具体试验结果如下：对三种浆果色素水提物和醇提物进行体外抗氧化活性实验,结果表明三种浆果色素粗提物可以有效的清除DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基和过氧化氢自由基,并且具有较强的总还原能力和总抗氧化能力,但同种浆果的不同提取物抗氧化能力有所不同。笃斯越橘色素醇提物清除DPPH自由基能力最强,清除率为（93.50±3.28）%；紫叶稠李色素水提物清除羟自由基能力最强,清除率为（95.45±3.13）%；笃斯越橘色素醇提物清除超氧阴离子自由基能力最强,清除率为（98.80±2.02）%；山桃稠李色素水提物清除过氧化氢自由基能力最强,清除率为（70.71+2.75）%；山桃稠李色素醇提物总还原能力最强为1.901；山桃稠李色素醇提物总抗氧化能力最强为13.51单位/mL。对三种浆果色素提取物纯化后进行体外抗氧化活性实验并与Vc对比,结果表明三种浆果色素提取物纯化后抗氧化能力较强,除笃斯越橘色素提取物纯化后对DPPH自由基的清除能力略大于Vc,其他情况均小于Vc。并且在抗氧化能力近似的情况下,色素提取物纯化后与纯化前的质量浓度相差几倍或几十倍,说明三种浆果色素提取物纯化后抗氧化能力比色素粗提物抗氧化能力大幅度增强了。三种浆果色素提取物纯化后对人结肠癌HT29细胞、人肝癌HepG2细胞和人宫颈癌Hela细胞都具有抑制作用,且随着质量浓度的增加和作用时间的延长,对肿瘤细胞的抑制率逐渐增强。比较得出山桃稠李色素提取物纯化后对HT29细胞和Hela细胞的抑制效果最好,抑制率分别为（60.88±4.54）%和（64.37±4.08）%,笃斯越橘色素提取物纯化后对HepG2细胞的抑制效果最好,抑制率为（63.74±4.48）%。三种肿瘤细胞中谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、总超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶的活性和一氧化氮的含量都随三种浆果色素提取物纯化后浓度的升高而减少,具有一定的量效关系,而细胞中MDA的含量随三种浆果色素提取物纯化后浓度的升高而增加,呈线性关系。表明三种浆果色素提取物纯化后可降低体内抗氧化酶的活性,增加细胞中脂质过氧化产物含量,并能降低一氧化氮合酶活性和一氧化氮含量,从而抑制肿瘤细胞的增长。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 三种浆果简介
• 1.1.1 笃斯越橘简介
• 1.1.2 紫叶稠李简介
• 1.1.3 山桃稠李简介
• 1.2 抗氧化作用概述
• 1.3 自由基
• 1.3.1 自由基的概念和性质
• 1.3.2 自由基的产生
• 1.3.3 自由基对机体的损伤
• 1.3.4 自由基的清除
• 1.4 体外抗氧化活性的检测方法
• 1.5 花色苷
• 1.5.1 花色苷简介
• 1.5.2 花色苷的结构
• 1.5.3 花色苷的理化性质
• 1.5.4 花色苷稳定性的影响因素
• 1.5.5 花色苷的生理活性
• 1.6 研究目的和意义
• 1.7 研究内容和方法
• 2 三种浆果色素体外抗氧化活性研究
• 2.1 引言
• 2.2 试验材料
• 2.2.1 药品及试剂
• 2.2.2 仪器与设备
• 2.3 试验方法
• 2.3.1 三种浆果粉末的制备
• 2.3.2 三种浆果粗提物的制备
• 2.3.3 三种浆果色素的提取和纯化
• 2.3.4 三种浆果花色苷含量测定
• 2.3.5 体外抗氧化活性研究
• 2.3.6 统计学处理
• 2.4 结果与分析
• 2.4.1 三种浆果花色苷的含量
• 2.4.2 三种浆果色素粗提物的体外抗氧化活性
• 2.4.3 三种浆果色素提取物纯化后体外抗氧化活性
• 2.5 本章小结
• 3 三种浆果色素对肿瘤细胞的抑制作用
• 3.1 引言
• 3.2 试验材料
• 3.2.1 药品及试剂
• 3.2.2 仪器与设备
• 3.3 溶液配制
• 3.3.1 PBS缓冲溶液的配制
• 3.3.2 胰蛋白酶溶液的配制
• 3.3.3 MTT溶液的配制
• 3.3.4 血清灭活
• 3.3.5 细胞培养液的配制
• 3.3.6 细胞冻存液的配制
• 3.4 试验方法
• 3.4.1 细胞培养
• 3.4.2 三种浆果色素的制备
• 3.4.3 三种浆果色素对肿瘤细胞抑制率测定
• 3.4.4 统计学处理
• 3.5 结果与分析
• 3.5.1 三种浆果色素对人结肠癌HT29细胞的抑制作用
• 3.5.2 三种浆果色素对人肝癌HepG2细胞的抑制作用
• 3.5.3 三种浆果色素对人宫颈癌Hela细胞的抑制作用
• 3.5.4 笃斯越橘色素对三种肿瘤细胞抑制作用比较
• 3.5.5 紫叶稠李色素对三种肿瘤细胞抑制作用比较
• 3.5.6 山桃稠李色素对三种肿瘤细胞抑制作用比较
• 3.6 本章小结
• 4 三种浆果色素对肿瘤细胞的影响
• 4.1 引言
• 4.2 试验材料
• 4.2.1 药品及试剂
• 4.2.2 仪器与设备
• 4.3 试验方法
• 4.3.1 细胞内GSH-PX、CAT、T-SOD、NOS活性和NO、MDA含量测定
• 4.3.2 统计学处理
• 4.4 结果与分析
• 4.4.1 细胞内GSH-PX活性变化
• 4.4.2 细胞内CAT活性变化
• 4.4.3 细胞内T-SOD活性变化
• 4.4.4 细胞内NOS活性变化
• 4.4.5 细胞内NO含量变化
• 4.4.6 细胞内MDA含量变化
• 4.5 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢