论文摘要
目的 恶性肿瘤是严重危害人类身体健康和生命的疾病,由于缺乏敏感、有效的治疗方法,通常无法有效地遏止肿瘤的复发和转移。所以,急待探索理想的治疗方法。肿瘤生物治疗的低毒性和低副作用己受到广泛关注。肿瘤的免疫治疗是生物治疗重要方法之一,目前,抗独特型抗体疫苗、抗原疫苗及DNA疫苗等都取得一定的进展,但仍然存在某些不足,没有达到预想的结果。噬菌体表面展示技术（bacteriophage display）是将外源蛋白或多肽以融合蛋白形式展示在噬菌体的壳蛋白上,并能够保持原有的空间结构和生物活性而受到广泛关注。表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）是较早发现的肿瘤相关抗原,上皮来源的恶性肿瘤有不同程度的高表达,利用单克隆抗体治疗EGFR阳性表达的恶性肿瘤己取得一定的进展,并进入临床实验阶段。本实验构建了EGFR为靶向的重组T7噬菌体载体疫苗,并进一步探讨在体的免疫活性以及抗肿瘤作用,为抗肿瘤疫苗的发展奠定基础。 材料和方法 通过检索GenBank数据库,依据NCBI提供的EGFR膜外部分的序列,利用Primer Premier 5.0软件设计引物,通过RT-PCR技术,从高表达EGFR的人肺腺癌A549细胞中克隆EGFR膜外DNA片段。设计5’端分别含有EcoRI和HindIII限制性酶切位点的引物,亚克隆约1800bp的DNA片段;与pMD18-T克隆载体连接、转化、扩增、提取质粒,由上海基康生物工程有限公司测序鉴定。根据T7噬菌体表达载体插入外源DNA片段的长度限制,以及EGFR膜外不同区域的功能特性,使用蛋白分析软件,得到模拟蛋白抗原呈递较佳多肽序列;设计分别含有EcoRI和HindIII限制性酶切位点的引物,以鉴定正确的质粒为模板,进行DNA片段亚克隆;然后与T7噬菌体表达载体臂连接、包装、
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标签：表皮生长因子受体论文; 噬菌体展示论文; 构建论文; 抗肿瘤疫苗论文; 抗体论文; 细胞毒性淋巴细胞反应论文;