论文摘要
siRNA抑制SGC7901细胞系肝素酶表达及抑制其侵袭转移的研究目的经多体外RNAi实验筛选肝素酶靶向的高效siRNA分子，并以此抑制SGC7901细胞系肝素酶的表达，并通过体外侵袭实验和动物实验，观察SGC7901细胞系肝素酶表达抑制后侵袭转移能力的变化。方法联合应用生物信息学技术与高效siRNA设计原则进行siRNA分子设计，并通过体外转录与化学合成小干扰RNA（siRNA），经脂质体转染胃癌细胞系；结合RT-PCR，Real-Time PCR，Western印迹检测RNA干扰效率；通过体外侵袭实验与动物实验分别评价肝素酶RNAi后胃癌细胞系的侵袭与腹膜转移能力变化。结果siRNA转染浓度40nmol／L，作用48小时，HPA mRNA抑制率经半定量RT-PCR检测已达（79±6.9）％，经Real-Time PCR检测，RNAi效率相对空白对照达88.4％，相对于阴性对照达58.1％，作用72小时Western Blotting未检测到HPA蛋白表达，且siRNA干涉效率具有转染浓度依赖性。侵袭实验结果显示HPA干扰组与对照组之间差异均有统计学差异（P1=0.018；P2=0.022；P3=0.028）。HPA干扰组侵袭抑制率3次实验分别为（57±40）％，（68±42）％，（59±29）％，平均抑制率为（61±36）％。HPA稳定RNAi细胞株腹膜转移能力检测：经腹腔注射SGC7901细胞与HPA稳定RNAi的细胞株及其对照细胞株2周后，解剖观察腹膜成瘤情况，以组间转移瘤总重量作Tamhane’s T2（方差不齐）检验衡量细胞株的转移能力，每组5只裸鼠。2周后空白对照组与阴性对照组在转移瘤总重量上无统计学差异，实验组与阴性对照组间在转移瘤总重量有统计学差异。结论1、序列为5’GAACAGCACCUACUCAAGAUU3’（正义链）的siRNA分子可特异性抑制SGC7901细胞系HPA的表达；2、当转染浓度为40nmol／L，作用时间为48小时，HPA靶向siRNA可产生较强的基因沉默效应；3、体外行肝素酶RNAi抑制肝素酶表达后可抑制SGC7901细胞系侵袭能力；4、肝素酶稳定RNAiSGC7901细胞株在裸鼠体内腹膜转移能力下降。