小鼠卵巢对生殖泌尿器官中Lox家族及弹性蛋白表达调控的研究

论文摘要

[目的]盆腔器官脱垂（POP）是妇科常见病,多见于中老年女性,发病率较高。子宫脱垂又常常伴随着尿失禁（UI）,随着盆腔内器官膨出部分的增多尿失禁的发生率上升。这两种疾病严重影响女性的生活质量,它们的发病机制尚不完全清除。从流行病学上看,衰老是盆腔器官脱垂的最大风险因素之一,该病多发于绝经后。从解剖学上看,盆腔内韧带包围着盆腔内器官并把它们松散地连接到起支持作用的肌肉和骨骼上,它是一种结缔组织网状结构,若其无法正常合成或修复异常,都会增加妇女患盆腔器官脱垂的风险。弹性纤维是结缔组织重要的组成成分,其发生过程离不开Lox家族,原弹性蛋白活化为弹性蛋白需要Lox家族催化。Lox11基因敲除小鼠弹性纤维的发生障碍会引起子宫脱垂,排尿功能障碍,类似女性的尿失禁症状。Lox11在幼年小鼠的生殖道中高表达,随着年龄的增长表达量逐渐下降；子宫脱垂多发于绝经后,因此我们推测出这样的关系：生殖衰老——Loxl1表达下降或消失——弹性纤维形成缺陷——盆腔器官脱垂和尿失禁。Lox家族总共5个成员,目前对Lox和Lox11的研究较多,但是其他成员在子宫中也有表达,它们是否与子宫脱垂相关仍需要相关的实验加以证实和完善。本实验利用药物诱导小鼠卵巢衰老,并以其为衰老模型小鼠来探讨三个问题：（1）小鼠子宫、阴道和膀胱中Lox家族及弹性蛋白在卵巢衰老过程中的变化；（2）Lox家族及弹性蛋白上游受何种因素的调控；（3）通过调控Lox家族及弹性蛋白的表达是否可以恢复表型的改变。期望可以为盆腔器官脱垂的预防和治疗提供新思路。[方法]（1）给2月龄的小鼠腹腔注射环磷酰胺120 mg/kg,皮下注射白消安12 mg/kg,饲养一个月后,检测小鼠血清雌二醇水平,作为卵巢衰老的一个指标。（2）提取子宫、阴道和膀胱组织里的总RNA,去DNA和蛋白后反转录出cDNA,通过实时荧光定量PCR（Real-time PCR）对Lox家族和Elastin进行相对定量。（3）给卵巢衰老小鼠注射雌二醇,注射量为50 ug/kg,注射3天通过实时荧光定量PCR （Real-time PCR）对Lox家族和Elastin进行相对定量。（4）数据用平均数+SD表示,结果进行t检验,P<0.05代表差异有统计学意义。[结果]（1）衰老小鼠血清的雌二醇水平与对照组2月龄小鼠相比下降43.9%,差异有统计学意义（P<0.05）。（2）卵巢衰老小鼠与对照组2月龄小鼠相比,子宫壁变薄,韧性变差,剥离时极易断裂；阴道壁变薄。（3）与对照组2月龄小鼠相比,Lox、Lox11和Lox12在卵巢衰老小鼠的子宫、阴道、膀胱中的表达量下降,差异有统计学意义（P<0.05）。Lox13和Elastin在卵巢衰老小鼠的子宫和阴道中的表达量下降,差异有统计学意义（P<0.05）。Lox14在卵巢衰老小鼠的膀胱中表达量下降,差异有统计学意义（P<0.05）。（4）与卵巢衰老小鼠相比,Lox在给予雌二醇干预的卵巢衰老小鼠的阴道中以及Lox11和Lox12在其膀胱中的表达量上升,差异有统计学意义（P<0.05）。[结论]（1）卵巢可以调控小鼠子宫、阴道和膀胱中Lox家族及Elastin的表达。卵巢衰老后小鼠子宫、阴道和膀胱中Lox家族大部分成员及Elastin的表达量都明显下降。衰老是盆腔器官脱垂的高危因素,这可能主要是由卵巢的衰老引起的。（2）雌激素可以上调卵巢衰老小鼠阴道中Lox的表达,也可以上调膀胱中Lox11和Lox12的表达。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 1. 前言
• 1.1 盆腔器官脱垂的研究现状
• 1.2 尿失禁研究现状
• 1.3 Lox家族背景概述
• 1.4 卵巢与Lox家族、弹性蛋白、盆腔器官脱垂的关系
• 2、材料和试剂
• 2.1 实验动物
• 2.2 主要试剂
• 2.3 主要仪器设备
• 3、实验方法
• 3.1 卵巢衰老小鼠模型制作
• 3.2 卵巢衰老小鼠雌二醇水平检测及组织形态观察
• 3.3 制备cDNA
• 3.4 Real-time PCR
• 3.5 卵巢衰老小鼠雌二醇干预
• 3.6 统计学方法
• 4. 实验结果
• 4.1 卵巢衰老小鼠模型状态观察
• 4.2 雌二醇水平检测及组织形态观察结果
• 4.3 Real-time PCR结果
• 5. 讨论
• 5.1 铜对Lox家族的调控作用
• 5.2 表皮角质细胞中Lox和Lox12的表达调控
• 5.3 活性物质诱导Lox11基因和Elastin基因的表达
• 5.4 卵巢与Lox家族及Elastin表达量之间的关系
• 6. 结论
• 附图
• 参考文献
• 致谢
• 学术论文评阅及答辩情况表