论文摘要
目的1.试图在裸鼠体内证实HBV X基因能否转化人肝细胞形成移植瘤。2.移植瘤的组织形态学观察。3.初步研究裸鼠成瘤的可能机制。方法1.利用已成功构建的高表达HBX基因的pCMVX/QSG7701细胞株作为实验组、以pRcCMV2/QSG7701细胞株和QSG7701细胞株为对照组接种于裸鼠皮下,观察裸鼠能否成瘤。2.观察裸鼠的一般情况以及移植瘤的大小、质地及周围组织转移情况等。第5周处死裸鼠,摘下移植瘤。3.HE染色、显微镜检研究移植瘤的组织形态学特征。4.RT-PCR方法研究移植瘤突变型P53基因和C-Myc基因在mRNA水平的表达情况。5.免疫组化方法研究移植瘤的突变型P53蛋白、C-Myc蛋白的表达情况。结果1.接种了pCMVX/QSG7701细胞株的裸鼠自接种日起至接种后三周活动度、进食无异常,体重逐渐增加,但自第四周起活动度减少、进食量下降、体重无明显增加。而接种了pRcCMV2/QSG7701细胞株和QSG7701细胞株的裸鼠精神、进食始终未出现异常,体重逐渐增加。2.接种pCMVX/QSG7701细胞株的裸鼠在第二周开始出现移植瘤生长,成瘤率100%,周围器官和组织未发现转移灶。对照组至接种后第35天无移植瘤生长。3.HE染色证实移植瘤为肝细胞癌组织。4.移植瘤、pCMVX/QSG77细胞、pRcCMV2/QSG7701细胞和QSG7701细胞中均有突变型P53 mRNA及突变型P53蛋白的表达。移植瘤和pCMVX/QSG7701细胞中突变型P53 mRNA及突变型P53蛋白的表达量较pRcCMV2/QSG7701细胞、QSG7701细胞明显增高。5.移植瘤、pCMVX/QSG7701细胞、pRcCMV2/QSG7701细胞和QSG7701细胞中均有C-Myc mRNA及C-Myc蛋白的表达。移植瘤和pCMVX/QSG7701细胞中c-Myc mRNA及C-Myc蛋白的表达水平较pRcCMV2/QSG7701细胞、QSG7701细胞明显增高。结论①转染了HBX基因的人源性永生化非瘤性肝细胞株pCMVX/QSG7701细胞接种于裸鼠皮下形成移植瘤,成瘤率100%,证实HBx表达可以直接导致肝细胞癌变。②本实验在mRNA和蛋白水平证实HBx能上调移植瘤和pMVX/QSG7701细胞中突变型P53和C-Myc的表达,并可能通过这一机制导致肝细胞癌变。
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