Tregs在日本血吸虫感染小鼠DCs抑制过敏性哮喘中作用的实验研究

论文摘要

目的通过过继转移日本血吸虫感染小鼠DCs,探讨蠕虫感染DCs是否通过诱导Tregs产生来抑制过敏性哮喘的发生进展。方法用CD11c+磁珠分离纯化日本血吸虫感染鼠及正常鼠CD1lc+DCs,分别标记为SJDCs和NDCs。部分SJDCs和NDCs用含0.1 mg/mlOVA的完全培养基培养72h,用ELISA试剂盒检测上清液中IL-12和IL-10分泌水平。部分SJDCs和NDCs用于过继转移：将15只BALB/c小鼠,随机分为3组,A组为过继转移SJDCs并诱发过敏性哮喘组,B组为过继转移NDCs并诱发过敏性哮喘组,C组为单纯过敏性哮喘组。A、B两组小鼠经尾静脉过继转移1×106DCs,2小时后A、B、C三组均开始诱发哮喘。4周后,处死小鼠,收集脾脏单个核细胞悬液,用流式细胞仪检测CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞（Foxp3+Tregs）、CD4+CD25+IL-10+调节性T细胞（IL-10+Tregs）以及CD4+T细胞内细胞因子IL-4、IL-5、IFN-y表达情况；收集小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）进行嗜酸性粒细胞计数；取小鼠肺组织作病理切片及免疫组化染色,观察肺组织炎症变化和CCL-11表达。结果SJDCs和NDCs培养上清液中IL-10分泌水平分别为（64.80±3.6050）ng/ml、（43.45±0.7720）ng/ml; IL-12分泌水平分别为（5.88±0.0429）ng/ml、（5.91±0.0330）ng/ml,和NDCs相比,SJDCs IL-10分泌水平显著提高（P<0.001）,但两者IL-12分泌水平无显著性差异（P>0.05）。A、B、C三组小鼠Foxp3+Tregs占CD4+T细胞的百分比分别为（8.44±0.3209）%、（4.34±0.6465）%、（3.62±1.2834）%；IL-10+Tregs占CD4+T细胞的百分比分别为（4.86±0.8112）%、（2.80±0.6205）%、（2.30±0.9138）%；IL-4+CD4+T细胞占CD4+T细胞的百分比分别为（3.54±0.8444）%、（5.68±0.7328）%、（5.96±1.992）%；IL-5+CD4+T细胞占CD4+T细胞的百分比分别为（4.20±0.6745）%、（6.70±0.6285）%、（6.82±1.9955）%；IFN-y+CD4+T细胞占CD4+T细胞的百分比分别为（7.82±0.9550）%、（7.064±2.1733）%、（7.98±3.9392）%,与B、C组比较,A组Foxp3+Tregs、IL-10+Tregs水平显著增高（P<0.01,P<0.001）,CD4+T细胞内IL-4、IL-5水平显著降低（P<0.01）,三组CD4+T细胞内IFN-y水平无显著性变化（P>0.05）。A、B、C三组小鼠BALF中嗜酸性粒细胞的总数目（104）分别为6.083±1.4043、26.100±4.7647、35.733±7.3730,A组和B、C组之间比较,A组嗜酸性粒细胞数目显著降低（P<0.05）。A、B、C三组小鼠肺组织免疫组化染色显示,CCL-11在小鼠肺组织中血管、气管内的阳性区域面积占血管、气管总面积的百分比分别为0.2737±0.0218、0.4818±0.0199、0.5339±0.0322；CCL-11在小鼠肺组织中阳性区域平均光密度值分别为0.2546±0.0172、0.3160±0.0235、0.3874±0.0236,与B、C组比较,A组CCL-11在小鼠肺组织中血管、气管内的阳性区域面积占血管、气管总面积的百分比及阳性区域平均光密度值明显下降（P<0.05）。肺组织病理切片显示,与B、C组比,A组肺部炎症明显减轻。结论蠕虫感染DCs能够通过增强Tregs的反应来抑制过敏性哮喘的发生进展。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 对象和方法
• 1.1 阳性钉螺
• 1.2 实验动物
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要仪器设备
• 1.5 液体配制
• 1.6 日本血吸虫感染动物模型的建立
• 1.7 树突状细胞的提取
• 1.8 树突状细胞细胞因子水平检测
• 1.9 实验动物模型的建立
• 1.10 流式细胞术相关检测
• 1.11 支气管肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞计数
• 1.12 肺组织病理切片制作
• 1.13 统计学分析
• 结果
• 2.1 树突状细胞培养上清液中细胞因子水平
• +Treg细胞水平'>2.2 Foxp3⁺Treg细胞水平
• 2.3 胞内细胞因子表达水平
• 2.4 嗜酸性粒细胞计数情况
• 2.5 肺组织病理变化
• 讨论
• 3.1 关于流式细胞术检测胞内细胞因子刺激方案选择的探讨
• 3.2 关于DCs和Tregs的免疫调节作用以及与疾病联系的探讨
• 3.3 关于实验结果的探讨
• 3.4 研究的意义与展望
• 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 附录
• 综述 调节性T细胞的研究进展
• 综述参考文献
• 致谢