血小板膜GPⅡb基因多态性与缺血性脑卒中相关性研究

论文摘要

目的：脑血管病（Cerebrovascular Disease, CVD）是威胁人类生命的主要疾病之一,缺血性脑卒中（Ischemic Stroke, IS）约占CVD的70%。IS在国内外具有很高的致残率和病死率,大动脉粥样硬化以及在此基础上的动脉血栓形成、心源性栓子和小血管病等是IS的主要发病机制。血小板在血栓形成尤其是动脉血栓形成过程中起着十分重要的作用。血小板膜糖蛋白（Glycoprotein, GP）基因多态性影响了血小板的功能,可能是导致动脉血栓性疾病（急性心肌梗死,IS）发生的危险因素之一。随着分子生物学技术的迅猛发展,血小板膜GP基因多态性在IS发病机制中的作用受到普遍关注,基因易感性可增加脑血管血栓性疾病发病的危险性,研究探讨血小板膜GP基因多态性与IS的相关性,可为IS的早期检测和防治提供分子遗传学依据。GPⅡb/Ⅲa复合体在血小板作为媒介引起的血栓形成中发挥重要作用。近年来,国外有报道显示,血小板膜GPⅡbSer843纯合子与年轻女性IS患者的危险性有关,血小板膜GPⅡbIle843与年老患者卒中后病死率增高的危险相关,国内有研究报道汉族人群中GPⅡb HPA-3基因多态性与冠心病的发生相关。但国内外关于人群中GPⅡb HPA-3多态性与IS发生的关系的研究结论不一,鉴于遗传因素在不同区域产生的作用不同,所以有必要在中国汉族人群中展开较为详细的研究,明确GPⅡb HPA-3基因多态性在IS发生过程中的作用,有助于指导血栓性疾病特别是IS的预防和治疗。本实验通过研究天津市汉族人群血小板膜GPⅡb HPA-3基因多态性的分布情况,从分子遗传学角度探讨单核苷酸多态性与IS关系,并且探讨血小板膜GPⅡb HPA-3基因多态性在血栓形成中的作用,探求抗血小板治疗的新思路,为其提供分子遗传学依据。方法：IS组150例,健康体检对照组135例,记录患者血管危险因素如吸烟（>10支/日,至少5年）、陈旧性脑梗死、高血压病、冠心病及糖尿病等病史。患者入院后立即用美国国立卫生院神经功能缺损评分（National Institutes of Health Stroke Scale, NIHSS）对其进行神经功能测评。病例组及对照组均晨起常规空腹静脉采血2 ml,所有血的检测指标均采用全自动生化分析仪测定总胆固醇（TC）甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）及空腹血糖（FPG）。测量血压和腰围。运用特异性PCR（PCR-RFLP）扩增和BseGI酶切分析,2.5%琼脂糖凝胶电泳确定基因型并基因序列测定技术检测等位基因,比较各基因型及基因频率的分布与IS的关系。统计学方法计量资料用t检验,计数资料用x2检验,用Logistic多元回归分析来控制其他混淆变量的影响,P<0.05时被认为差别有显著性。结果：1.采用独立样本t检验的方法算得：两组的平均年龄分别为67.50±19.76岁和63.23±12.23岁,t=3.040,P=-0.742,相匹配,无差异性。采用x2检验两组间的性别构成,无明显差别,x2=1.11,P=0.292,吸烟史在Is组61.35%,对照组36.75%,差异性有统计学意义；高血压、糖尿病、高血脂等危险因素在IS组均明显高于对照组,p<0.05。2.IS组、首发组、复发组和对照组GPⅡb HPA-3的基因型和等位基因频率分布情况：病例组ab 35.1%、aa 32%、bb 33%、a等位基因49.5%、b等位基因50.5%；对照组分别为23.7%、51.1%、25.2%、63%、37%。3.群体遗传性调查：GPⅡb HPA-3多态性在IS组、首发组、复发组和对照组中的分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律。4.IS组与对照组基因型频率及等位基因频率分布比较：两组间比较差异均有统计学意义,其中病例组bb基因型频率为40%,对照组为25.2%, x2=94.105,P=0.000。b等位基因频率Is组与对照组分别是55.3%、37%, x2=269.43l,P=0.000。bb基因型及b等位基因可能是IS的致病因素。5.IS亚组间各基因型和等位基因频率比较：首发组与复发组的各基因型差异无统计学意义,x2值=5.739,P=0.057。首发组与复发组等位基因比较有显著性,其中b等位基因频率分别是50.5%、64.2%,x2=5.157,P=0.023。b等位基因可能是IS发病和复发的危险因素。6.IS组不同性别各基因型及等位基因分布频率比较：IS组不同性别各基因型分布频率比较无统计学意义,x2=4.511,P=0.105。Is组不同性别等位基因分布频率比较无统计学意义,x2=0.682,P=0.409。7.IS组不同年龄组各基因型及等位基因间分布频率比较：IS组不同年龄组各基因型分布频率比较无统计学意义,x2=1.508,p=0.471。Is组不同性别等位基因分布频率比较无统计学意义,X2=1.185,P=0.276。8.IS组不同NIHSS分组各基因型及等位基因间分布频率比较：IS组不同NIHSS分组各基因型分布频率比较均有统计学意义,X2=29.217,P=0.000。Is组不同NIHSS分组等位基因分布频率比较均有统计学意义,X2=25.162,P=0.000。重度组bb基因型和b等位基因频率分别是43.8%和73.2%,较轻度组和中度组均高,因此bb基因型和b等位基因可能为影响IS病情严重程度的因素。9.病例组TOAST（?）不同分型各基因型分布频率比较无统计学意义,χ2=7.027,P=0.134。但等位基因间分布频率比较有统计学意义,大动脉粥样硬化性脑梗死（Large-artery atherosclerosis, LAA）组b等位基因频率61.8%高于其他组,χ2=6.573,P=0.037。10.IS的发病危险因素的Logistic回归分析：高血压及b等位基因有统计学意义,b等位基因进人方程后P=0.018,OR值为3.678,95%置信区间：1.246-10.863。可能为IS发病的独立危险因素。结论：血小板膜GPⅡb HPA-3基因多态性与IS发生及复发相关,bb基因型可能是IS的致病因素及复发高危因素,b等位基因可能是IS发病及复发的独立危险因素。bb基因型和b等位基因可能为影响IS病情严重程度的因素。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语/符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 对象和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 附录
• 综述 血小板膜糖蛋白基因多态性与缺血性卒中的关系
• 综述参考文献
• 致谢