RGD多肽表面修饰同种异体骨的方法研究

论文摘要

目的：1．探讨应用紫外辐射与化学耦和的方法，将含ROD序列的多肽共价接枝到同种异体骨表面，以提高材料对细胞的粘附能力，2．采用正交试验方案，选择将含RGD序列的多肽共价结合于同种异体骨片上最佳的试验因素及水平的组合。方法：采用紫外辐射活化同种异体骨表面的羧基，EDC作为耦和剂，将人工合成的含RGD序列的八肽（谷氨酸-脯氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-天冬酰胺-酪氨酸-精氨酸，Glu-Pro-Arg-Gly-Asp-Asn-Tyr-Arg，EPRGDNYR）共价接枝在骨片表面。以空白骨片为对照，用环境扫描电子显微镜观察骨片表面形貌变化，通过X线光电子能谱分析修饰表面的元素含量变化检测RGD多肽接枝情况。采取正交试验拟定RGD浓度为0.1mg／ml、0.5mg／ml和1mg／ml，紫外辐射时间为30、60和90分钟，EDC浓度为1％、2％和3％3个水平，进行正交试验。以氮元素含量为考核指标，对9次试验结果进行直观分析，确定试验因素对结果影响的主次关系以及每个因素的最佳水平，找出最佳组合。结果：经环境扫描电子显微镜观察发现固定RGD多肽后的骨片表面粗糙程度较空白骨片均有不同程度降低，骨盐支架结构稀疏，孔隙内被大量基质成分所充填，孔隙密度减小。接枝多肽后的骨片表面形貌均有所改变。X线光电子能谱分析仪（XPS）检测表明接枝多肽后的骨片其氮原子含量均较空白骨片有不同程度地增加，骨片上的酰胺键增强，证明多肽成功地固定于同种异体骨片表面。正交实验结果为：A因素中1、2、3水平和分别为12、16.7、10.3，极差为6.4，水平2较优；B因素中1、2、3水平和分别为12.5、14.8、11.7，极差为3.1，水平2较优：C因素中1、2、3水平和分别为11.7、10.6、16.7，极差为6.1，水平3较优。由此得出RGD浓度在三者中影响最重要，EDC浓度其次，紫外辐射时间再次之，最佳组合为A2B2C3。结论：经紫外辐射活化羧基，EDC耦合接枝RGD的方法，可成功将RGD多肽共价结合于同种异体骨片表面。由正交分析可知影响本实验因素的主次关系依次为RGD浓度，EDC浓度，紫外辐射时间。最佳试验方案为RGD浓度为0.5mg／ml，紫外辐射60分钟，EDC浓度为3％。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 符号说明
• 前言
• 材料和方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢