商品肉牛黏膜IgA的检测及分析

论文摘要

黏膜是动物有机体与外界环境相隔的最大屏障,是病原体入侵的最大门户。黏膜免疫系统是指外周淋巴器官中的黏膜部分,分主抗原接触部分和初次应答诱导部位以及一些大的表面区域（消化道、呼吸道、泌尿生殖道、外分泌腺等）。黏膜免疫是有机体抵御感染的最重要手段。黏膜免疫的主要效应因子是分泌型IgA（Secretory IgA）,不仅可以中和、排斥病原体、防止细菌、病毒与黏膜结合,而且还可以促进外分泌液中天然抗菌因子作用,并可调节黏膜免疫。黏膜免疫由于它的特殊地位,在机体与外界环境相互作用中发挥着重要作用,黏膜免疫系统中的免疫活性成份越来越引起人们的重视。本文通过双抗体夹心ELISA检测商品肉牛的口腔、胃（瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃）、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、鼻、支气管、肺、膀胱、尿液、泪液、胆汁、扁桃体等器官的分泌液中的IgA含量,来反映黏膜抗体IgA在消化道、呼吸道、泌尿生殖道等组织器官的大致分布状况。全文共分三部分:前言:概述了黏膜免疫系统及其功能,黏膜免疫应答的过程,黏膜免疫的细胞免疫和体液免疫等。黏膜免疫系统的研究不仅为传统的免疫学增加新内容,也为很多疾病的致病机理、病原与宿主的关系、疾病诊治、新型疫苗与预防制剂等研究提供了新的思路与方法。正文:本研究将牛初乳经10000r/min离心所得的乳清过葡聚糖G-200凝胶层析柱得IgA和IgG混合蛋白,再过纤维素DEAE-52柱纯化牛IgA,经SDS-PAGE电泳鉴定为电泳纯IgA。免疫兔制备兔抗牛IgA抗体,然后用辣根过氧化酶标记,制备兔抗牛IgA酶标抗体。同时将牛IgA免疫小鼠,制备出小鼠抗牛IgA抗体,应用本实验建立的双抗体夹心ELISA对采集的各黏膜部位（每个部位30个样品）进行检测。详述检测结果,由双抗体夹心ELISA OD值与IgA含量回归方程得到各部位IgA含量,并讨论。结论:成功的建立了检测肉牛黏膜IgA的双抗体夹心ELISA方法。根据建立的方法检测样品,结果显示:消化系统、呼吸系统、泌尿系统、泪液、胆汁、扁桃体黏膜部位的分泌液中均有IgA分泌,其中IgA含量较多的部位依次为瘤胃、胆汁、空肠、直肠、网胃、扁桃体;较少的依次为十二指肠,皱胃,盲肠。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 黏膜免疫简介
• 1.2 黏膜免疫系统概述
• 1.2.1 黏膜免疫系统
• 1.2.2 黏膜免疫系统的功能
• 1.2.3 黏膜免疫的细胞免疫
• 1.2.4 黏膜免疫的体液免疫
• 1.3 黏膜免疫及黏膜IgA的研究进展
• 1.4 研究的目的及意义
• 第二章 正文
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 试验方法
• 2.1.3 实际检测
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 牛IgA的分离与提纯
• 2.2.2 提纯的牛IgA的纯度鉴定
• 2.2.3 兔抗牛IgA抗体的特异性鉴定结果
• 2.2.4 牛IgA蛋白含量的测定
• 2.2.5 兔抗牛IgA酶标抗体效价的测定
• 2.2.6 小鼠抗牛IgA抗体含量测定及特异性鉴定
• 2.2.7 双抗夹心ELISA试验检测商品肉牛黏膜IgA各反应条件的确定结果
• 2.2.8 双抗体夹心ELISAOD值与IgA含量标准曲线的绘制及回归方程的建立
• 2.2.9 检测结果（见附表）
• 2.3 讨论
• 2.3.1 关于牛IgA的纯化及鉴定
• 2.3.2 关于鼠抗牛IgA抗体和兔抗牛IgA酶标二抗的制备
• 2.3.3 关于样品的采集
• 2.3.4 关于双夹心ELISA检测方法的建立
• 2.3.5 关于检测指标
• 2.3.6 关于检测结果
• 第三章 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 个人简介