喉癌侧群细胞生物学特性的研究

论文摘要

喉癌干细胞的研究目前只处在起始阶段,但这一概念为癌症的临床治疗提供了全新的视角,给人类战胜肿瘤带来了希望,对未来肿瘤研究的影响是不可估量的。本文以喉癌细胞系Hep-2为研究对象,采用荧光染料Hoechst33342对细胞染色后,应用流式分选技术检测分离SP和NSP亚群,应用RT-PCR、细胞免疫荧光、Western blot方法检测ABCG2分子在SP和NSP细胞中的表达,发现喉癌细胞系Hep-2中存在SP亚群,而且SP的表型与ABCG2密切相关。进一步通过观察分离后的SP和NSP细胞的生长形态、细胞周期分布、增殖能力、迁移能力、侵袭能力、粘附能力、克隆形成能力、对化疗药5-FU的耐药性等体外生物学特性及在免疫缺陷小鼠体内移植瘤成瘤能力来证实喉癌细胞系Hep-2的SP细胞是相对静止的,具有很强的增殖、分化、克隆形成、迁移、侵袭、成瘤及化疗耐药能力的干细胞样的细胞亚群。最后按照前期实验方法对40例临床喉癌标本原代培养细胞进行Hoechst33342染色后,通过流式细胞仪检测临床喉癌标本原代培养细胞中是否存在SP细胞,并探讨SP细胞与喉癌临床病理学因素的关系。经过研究发现检测的大部分喉癌标本中确实存在SP细胞亚群,SP细胞的比例与喉癌临床分期、病理分级相关。本实验进一步验证了肿瘤干细胞学说,探索了一种有意义的喉癌干细胞的分离方法,并初步确认了SP细胞与喉癌预后的关系,为今后喉癌干细胞的深层次研究奠定了初步的理论和实验基础。

论文目录

• 内容提要
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 参考文献
• 第一章 文献综述
• 1.1 文献综述一 肿瘤干细胞的研究进展
• 1.1.1 肿瘤干细胞理论
• 1.1.2 肿瘤干细胞的生物学特性
• 1.1.3 肿瘤干细胞的起源
• 1.1.4 肿瘤干细胞的分离、纯化和鉴定
• 1.1.5 肿瘤干细胞的研究现状
• 1.1.6 肿瘤干细胞的临床意义
• 1.1.7 结语
• 1.2 文献综述二 侧群细胞的研究进展
• 1.2.1 SP细胞的定义与发现
• 1.2.2 SP细胞的组织分布
• 1.2.3 SP表型的形成
• 1.2.4 SP细胞的生物特性
• 1.2.5 SP细胞的分离方法
• 1.2.6 SP细胞的检测及分选的影响因素
• 1.2.7 肿瘤组织中的SP细胞
• 1.2.8 SP细胞与肿瘤治疗策略
• 1.2.9 SP细胞研究存在的局限性
• 1.2.10 展望
• 参考文献
• 第二章 喉癌细胞系Hep-2中侧群细胞的检测和分选
• 2.1 材料方法
• 2.1.1 主要试剂和耗材
• 2.1.2 主要仪器
• 2.1.3 主要试剂配制
• 2.1.4 引物设计与合成
• 2.1.5 细胞株
• 2.2 方法
• 2.2.1 细胞的复苏
• 2.2.2 细胞的冻存
• 2.2.3 细胞的换液与传代
• 2.2.4 细胞活力测定
• 2.2.5 喉癌Hep-2细胞Hoechst33342染色
• 2.2.6 SP细胞的分选及纯度检测
• 2.2.7 SP和NSP细胞的培养
• 2.2.8 SP和NSP细胞爬片及HE染色
• 2.2.9 SP与ABCG2的相关性
• 2.2.10 统计学处理应用
• 2.3 结果
• 2.3.1 喉癌细胞系Hep-2细胞的培养情况
• 2.3.2 喉癌细胞系Hep-2细胞Hoechst33342染色情况
• 2.3.3 SP和NSP细胞的分选
• 2.3.4 SP和NSP细胞在常规培养条件下的生长特性
• 2.3.5 ABCG2与SP细胞
• 2.4 讨论
• 参考文献
• 第三章 喉癌细胞系Hep-2中侧群细胞的生物学功能鉴定
• 3.1 材料方法
• 3.1.1 主要试剂和耗材
• 3.1.2 主要仪器
• 3.1.3 主要试剂配制
• 3.1.4 细胞株
• 3.1.5 实验动物
• 3.2 方法
• 3.2.1 SP和NSP细胞形态学
• 3.2.2 SP和NSP细胞CCK-8增殖分析
• 3.2.3 SP和NSP细胞二维克隆能力检测
• 3.2.4 SP和NSP细胞三维克隆能力检测
• 3.2.5 SP和NSP细胞体外分化能力测试
• 3.2.6 SP和NSP细胞周期检测
• 3.2.7 SP和NSP细胞体外迁移能力检测
• 3.2.8 SP和NSP细胞体外侵袭能力检测
• 3.2.9 SP和NSP细胞体外粘附能力检测
• 3.2.10 SP和NSP细胞裸鼠体内致瘤能力检测
• 3.2.11 SP和NSP细胞对化疗药5-FU耐受能力检测
• 3.2.12 统计方法
• 3.3 结果
• 3.3.1 SP和NSP细胞形态学
• 3.3.2 SP和NSP细胞的体外增殖能力
• 3.3.3 SP和NSP细胞的克隆形成能力
• 3.3.4 SP和NSP细胞的体外分化能力
• 3.3.5 SP和NSP细胞的周期分析
• 3.3.6 SP和NSP细胞的体外迁移能力
• 3.3.7 SP和NSP细胞的体外侵袭能力
• 3.3.8 SP和NSP细胞的体外粘附能力
• 3.3.9 SP和NSP细胞的体内成瘤能力
• 3.3.10 SP和NSP细胞耐受化疗药物的能力
• 3.4 讨论
• 参考文献
• 第四章 喉癌标本原代培养细胞中侧群细胞的检测
• 4.1 材料方法
• 4.1.1 主要试剂和耗材
• 4.1.2 主要仪器
• 4.1.3 主要试剂配制
• 4.2 方法
• 4.2.1 胶原酶消化法获取喉癌原代细胞
• 4.2.2 喉癌原代培养细胞SP细胞的检测
• 4.2.3 喉癌SP细胞和喉癌临床病理特征的相关分析
• 4.2.4 统计方法
• 4.3 结果
• 4.3.1 喉癌原代培养细胞中SP细胞的检测
• 4.3.2 喉癌SP细胞和喉癌临床病理特征的相关分析
• 参考文献
• 第五章 结论
• 攻读博士期间发表的论文及成果
• 致谢