论文摘要
目的:观察大鼠脊髓半横断损伤后植入微囊化兔坐骨神经组织对NOS表达的影响,进一步探讨微囊化异种神经组织细胞移植治疗脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）的机制。方法:取Sprague-Dawley （SD）大白鼠100 只,体重220-250g,随机分为4组:A 微囊化兔坐骨神经组织细胞移植组（以下简称微囊组）30只;B 兔坐骨神经组织细胞移植组（简称细胞组）30只;C单纯损伤组（简称单损组）30只;D 正常对照组（简称正常组）10 只。无菌条件下取成年家兔双侧坐骨神经干,制备坐骨神经组织细胞悬液及微囊化坐骨神经组织细胞悬液。大鼠腹腔麻醉后,于第10 胸椎打开椎管暴露脊髓,去除右侧半约2mm3脊髓组织,将与脊髓损伤腔大小一致的明胶海绵吸附10ul的微囊化细胞悬液（A 组）或相同数量的细胞悬液（B 组）植入损伤处。A、B 和C 组于术后3、7、14d 各取10 只大鼠,4%多聚甲醛（PH7.4）经左心室主动脉插管灌注,取出损伤平面为中心的8mm脊髓段于上液中后固定2h,30%蔗糖溶液浸泡沉底,冰冻切片（冠状位,片厚25um）。切片分为二套,分别行尼氏（Nissl）染色和还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸-黄递酶（NADPH-d）组织化学染色。利用图象分析系统测量Nissl 染色标记细胞数,NADPH-d 组化染色阳性细胞数和阳性细胞平均面积、平均光密度。结果:SCI后神经元数量减少,尼氏体脱失、溶解;术后第7 天及第14 天微囊组Nissl染色神经元数量显著增多（P <0.05）。NADPH-d 组化染色见一氧化氮合酶阳性神经元呈蓝黑色,术后3 天,微囊组和细胞组NOS 阳性细胞数、阳性细胞平均面积及平均光密度均明显高于单损组（P <0.05）;第7 天时微囊组NOS 阳性细胞数和阳性细胞平均面积较细胞组高（P <0.01）;至第14 天,细胞组NOS阳性细胞数急剧增高超过微囊组,而微囊组仍平稳上升。结论: 微囊化兔坐骨神经组织移植能诱导早期NOS 表达增加及抑制后期NO 过量产生,减轻脊髓继发性损伤,有利于损伤脊髓的修复和再生。
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