缝隙连接Cx26和Cx30基因蛋白在哺乳动物耳蜗的细胞及亚细胞表达

论文摘要

目的:研究缝隙连接Cx26和Cx30在耳蜗侧壁中的表达和细胞分布,同时比较Cx26和Cx30在不同哺乳动物耳蜗中表达的差异。方法:采用免疫荧光染色方法和激光共聚焦显微镜检测大鼠、小鼠和豚鼠耳蜗侧壁血管纹和螺旋韧带中缝隙连接Cx26和Cx30表达和细胞分布情况。结果:耳蜗侧壁由血管纹和螺旋韧带组成,通过血管纹中间细胞的特异性细胞标记Kir4.1,我们检测到在血管纹中间细胞层,Cx26和Cx30均有广泛表达,并且呈树叶状分布;而在血管纹的基底细胞层,Cx26和Cx30表达呈六角形分布在细胞周围;Cx26和Cx30在血管纹的边缘细胞没有表达。在螺旋韧带中,Cx26和Cx30的表达与血管纹中不一样,Cx26和Cx30表达是沿着与螺旋韧带的纵轴垂直的方向排列分布的。Cx26主要表达在螺旋韧带的边缘部位,在螺旋韧带中间部位,即在螺旋韧带的血管纹侧表达较弱;而在螺旋韧带中间部位主要以Cx30表达为主。结论:Cx26和Cx30表达在耳蜗侧壁血管纹和螺旋韧带不同,在血管纹和螺旋韧带不同细胞中的表达也不一样,Cx26与Cx30在耳蜗侧壁的分布差异,提示Cx26和Cx30在耳蜗内淋巴电位和离子梯度的形成中发挥不同的作用。目的:研究不同哺乳动物耳蜗侧壁中缝隙连接Cx26和Cx30蛋白和mRNA表达情况及定量分析。方法:首先,采用Western-blot方法检测不同的动物（包括小鼠、大鼠和豚鼠）耳蜗侧壁血管纹和螺旋韧带,以及顶回和低回的血管纹和螺旋韧带中缝隙连接Cx26和Cx30蛋白表达情况及定量分析。其次,RT-PCR方法检测小鼠耳蜗血管纹和螺旋韧带中Cx26和Cx30的mRNA表达情况及定量分析。结果:耳蜗血管纹和螺旋韧带的Western-blot结果分析,显示三种动物的螺旋韧带中Cx26和Cx30蛋白表达量是高于血管纹Cx26和Cx30的蛋白表达量,在豚鼠、大鼠和小鼠螺旋韧带中的Cx26蛋白表达量分别是血管纹中的5.1958、1.7708和1.7570倍;三种动物Cx26蛋白表达量不同具有统计学差异（P< 0.05,ANOVA）。Cx30蛋白表达量在豚鼠、大鼠和小鼠螺旋韧带和血管纹的比例分别是4.2973、3.6205和3.5554,三种动物Cx30蛋白表达量不同没有显著统计学差异（P > 0.05,ANOVA）。此外,三种动物耳蜗侧壁顶回和底回Cx26和Cx30蛋白表达量比较结果,显示顶回和底回Cx26和Cx30蛋白表达量没有显著统计学差异（P > 0.05,T-test）。RT-PCR结果显示小鼠耳蜗螺旋韧带中Cx26和Cx30的mRNA表达要高于血管纹,Cx26和Cx30在螺旋韧带与血管纹的比值分别是1.8812和1.1643倍。结论: Cx26和Cx30的蛋白和mRNA表达在耳蜗螺旋韧带总是要高于血管纹,在不同动物耳蜗血管纹和螺旋韧带的表达不一样;Cx26和Cx30在侧壁表达的差异提示Cx26和Cx30在内耳侧壁中的作用可能不完全一样。目的:研究耳蜗基底膜组织中Cx26、Cx30和紧密连接ZO1的表达和相互关系。方法:采用免疫荧光双标记和激光共聚焦显微镜方法观察耳蜗基底膜组织中缝隙连接Cx26和Cx30与紧密连接ZO1的分布和相互关系。结果:在耳蜗基底膜非感觉上皮细胞,Cx26和Cx30共同表达在Hensen细胞、内外支柱细胞和Claudius细胞,Cx26在基底膜的表达部位大部分与Cx30的表达重合;在蜗轴螺旋缘也检测到Cx26和Cx30表达。在耳蜗内、外毛细胞没有Cx26和Cx30的表达。Cx26和ZO1在基底膜表达不重合,在基底膜的不同层面,Cx26和ZO1的表达逐渐发生改变;在基底膜网状板面,ZO1广泛分布在与内、外毛细胞和与之相邻的支持细胞之间的细胞连接中,Cx26在基底膜网状板面没有表达。而在基底膜深面, Cx26广泛分布在基底膜组织的各种支持细胞,在该层面没有发现的ZO1表达。结论:Cx26和Cx30分布在基底膜的各种支持细胞,在感觉毛细胞没有表达;此外,该研究发现Cx26和ZO1在耳蜗内具有不同的表达方式和表达部位,紧密连接ZO1在网状板面构成了毛细胞之间或与其支持细胞之间的离子屏障,阻止内、外淋巴之间的相互流通,保持了各自之间的离子平衡;缝隙连接则表达在基底膜的深层,参与离子转运。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 参考文献
• 第一部分 耳蜗侧壁中缝隙连接CX26 和CX30 的表达和细胞分布研究
• 材料和方法
• 实验结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 哺乳动物耳蜗侧壁CX26 和CX30 蛋白和MRNA 表达的定量研究
• 材料和方法
• 实验结果
• 讨论
• 第三部分 CX26、CX30 和紧密连接Z01 在耳蜗基底膜组织的表达和相互关系
• 材料和方法
• 实验结果
• 讨论
• 参考文献
• 综述
• 缝隙连接蛋白与耳蜗内环境稳定
• 参考文献
• 附录
• 致谢