同步筛检三种残留药物的快速检测方法的探索性研究

论文摘要

药物残留一直是食品安全领域的热点问题,不同种类不同程度的残留药物可通过环境和食物链对机体产生多种直接和间接危害。而实际检测方法中的样品单一性、操作的繁琐性和设备与成本的昂贵性等缺点,使得对能广谱特异、低耗高效和灵敏便捷地同步筛检方法的需要显得尤为迫切。基于此,本研究开展的主要目的为最终利用一种融合抗体同时与相关的三种残留药物发生免疫学反应,所建立的方法也能同时筛检三种药物。本实验具体分为一个基础和两个研究展开方向。基础为氯霉素和磺胺二甲嘧啶（CAP和SM2）单克隆抗体的制备,并对纯化的抗体进行六个方面的特性鉴定。首先,从分子水平探讨,分别克隆、组装、串联和表达了CAP、SM2和环丙沙星（CPFX）单链抗体及串联后的融合抗体,并对单链抗体的二级结构进行预测。然后,从免疫学角度出发,利用CAP和SM2纯化后的单克隆抗体,分别建立直接和间接竞争ELISA方法,获得标准曲线后比较两类检测方法,对同一样品实样检测均具有较好的相关性;同时利用胶体金试纸初步组装了氯霉素金标检测试纸。利用建立的优化ELISA条件分别检测纯化后的三种单链抗体和融合抗体,并平行比较相对应的单克隆抗体、单链抗体和融合抗体。结果显示:利用融合单链抗体同步筛检三种药物的方式可行。

论文目录

• 提要
• 前言
• 第一篇 文献综述
• 综述一 常检的残留药物的研究概况
• 1 氯霉素的研究概况
• 2 磺胺二甲嘧啶的研究概况
• 3 环丙沙星的研究概况
• 综述二 药物残留检测方法的研究进展
• 1 微生物法
• 2 色谱方法
• 3 免疫分析方法
• 4 CHARM II 分析法
• 5 其它化学分析方法
• 综述三 单链抗体研究进展及应用前景
• 1 传统单链抗体的制备
• 2 单链抗体的表达
• 3 单链抗体的发展进程
• 4 单链抗体的应用
• 5 单链抗体在治疗中的不足与展望
• 第二篇 研究内容
• 实验一 氯霉素和磺胺二甲嘧啶完全抗原的制备与分析
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 实验二 氯霉素和磺胺二甲嘧啶的单克隆抗体的制备、纯化及其特性
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 实验三 氯霉素和磺胺二甲嘧啶单克隆抗体的直接法和间接法 ELISA检测方法的建立
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 实验四 氯霉素胶体金检测试纸的研制
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 实验五 氯霉素，环丙沙星和磺胺二甲嘧啶的三种单链抗体基因的克隆和序列分析
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3. 讨论
• 4 小结
• 实验六 氯霉素、环丙沙星和磺胺二甲嘧啶的单链抗体基因的表达及活性研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 实验七 CAP-SCFV，CPFX-SCFV和SM2-SCFV的融合基因串联、表达、纯化及免疫学活性的研究
• 1 材料
• 2 结果一
• 3 结果二
• 4 讨论
• 5 小结
• 结论
• 附录
• 参考文献
• 攻读博士期间发表的学术论文及其它成果
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢
• 导师及作者简介
• CURRICULUM VITAE