首页> 正文

转Bt基因甘蓝的抗虫性研究

2020-12-08阅读(533)

转Bt基因甘蓝的抗虫性研究

论文摘要

本实验分别对激素、外植体类型、无菌苗培养时间及硝酸银和乙酰丁香酮浓度等影响甘蓝08J80外植体再生的因素进行了研究,建立了甘蓝下胚轴高效再生体系。利用该再生体系采用农杆菌介导法,将表达不同苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因CryIAc、CryIC分别转化甘蓝中甘8号和08J80,获得再生植株。将生根植株置于添加5 mg/L卡那霉素的生根培养基上筛选。提取筛选后存活且生长正常的植株的DNA,以目的基因为引物,进行PCR检测,获得扩增出目的基因的植株。以CryIAc基因为探针,将部分转基因植株进行Southern blot分析,证明外源基因已经整合到甘蓝基因组中。提取转基因植株根、茎、幼叶和成熟叶部位的的RNA,反转录成cDNA后,再进行PCR扩增,通过RT-PCR实验以检测抗虫基因在转基因植株各组织的表达情况。室内离体叶片抗虫试验中,观察转基因甘蓝叶片和野生型甘蓝叶片的损害程度,统计幼虫校正死亡率,平均单虫重,解剖正常死亡和中毒死亡的虫体,观察其肠道的差异。本研究获得的主要结果如下：1.建立的甘蓝下胚轴再生体系为：选取6d至7d苗龄的下胚轴,将其置于MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.05mg/L+AgNO3 5mg/L的芽分化培养基中,芽分化为丛生芽,频率高达80%。2.获得的甘蓝再生植株中,转CrylAc基因的中甘8号植株369株,转CrylC基因的中甘8号甘蓝412株,转CrylAc基因的08J80750株。在不定芽生根过程中,杂交甘蓝的生根率达到60%,08J80的生根率约为10%,其中08J80甘蓝在不定芽及生根阶段玻璃化很严重。3.在含有5 mg/L卡那霉素的生根培养基中筛选转化植株,获得转CryIAc基因的杂交甘蓝5株,转CryIC基因的中甘8号甘蓝5株,转CryIAc基因的08J80甘蓝3株。4.PCR检测,能够扩增出目的条带的植株中,转CryIAc基因的中甘8号甘蓝4株,转CryIC基因的中甘8号甘蓝4株,转CryIAc基因的08J80甘蓝3株。阳性检测率超过90%。5.部分转CryIAc植株的Southern blot结果表明外源基因已经整合到甘蓝的基因组中。6.部分转CryIAc基因植株的RT-PCR结果显示,CrylAc基因在转基因植株各组织呈组成型表达。7.室内离体叶片抗虫试验结果表明,转基因植株叶片的损害程度较轻,野生型植株叶片损害严重；啃食转基因植株叶片的小菜蛾在24h至72h时期内出现中毒死亡现象,啃食野生型甘蓝叶片的小菜蛾虫体活泼,72h后存活的昆虫生活力强,且虫体同72h之前稍大；啃食转基因植株的昆虫校正死亡率超过80%,转基因植株叶片上昆虫的单虫重同野生型叶片上昆虫的单虫重相比差异显著。解剖虫体实验结果显示,野生型叶片上死亡的虫体的肠道完整无损,无异常情况,转基因叶片上死亡的虫体肠道肿胀变粗,呈褐色,有的部位开始腐烂。这些现象说明Bt杀虫蛋白能够有效杀死小菜蛾等鳞翅目昆虫。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 缩略语表
  • 1 文献综述
  • 1.1. 课题的提出
  • 1.2. 抗虫基因的分类及特点
  • 1.3. 抗虫基因工程的进展
  • 1.4. 抗虫基因工程遇到的问题及解决方案
  • 1.5. 叶绿体转化的抗虫基因工程的进展
  • 1.6. 本研究的目的和意义
  • 1.7. 本实验的技术路线
  • 2. 材料与方法
  • 2.1. 甘蓝08J80再生试验
  • 3浓度对外植体褐化的影响'>2.1.1. AgNO3浓度对外植体褐化的影响
  • 2.1.2. AS对外植体不定芽分化的影响
  • 2.1.3. 6-BA浓度对甘蓝再生影响
  • 2.1.4. 外植体类型对甘蓝再生影响
  • 2.1.5. 苗龄对再生影响
  • 2.2. 甘蓝遗传转化
  • 2.3. 转基因甘蓝的分子检测
  • 2.4. Southern blot检测
  • 2.5. RT-PCR检测
  • 2.6. 转基因甘蓝离体叶片的抗虫性试验
  • 3. 结果与分析
  • 3.1. 不定芽再生
  • 3浓度对甘蓝外植体褐化抑制效果'>3.1.1. AgNO3浓度对甘蓝外植体褐化抑制效果
  • 3.1.2. AS对外植体分化不定芽的影响
  • 3.1.3. 6-BA浓度对外植体再生频率的影响
  • 3.1.4. 外植体类型对甘蓝不定芽再生的影响
  • 3.1.5. 甘蓝无菌苗苗龄对外植体再生频率的影响
  • 3.2. 遗传转化结果分析
  • 3.2.1. 外植体的转化
  • 3.3. 转基因甘蓝植株PCR检测分析
  • 3.4. 转基因植株的Southern blot检测
  • 3.5. 转基因植株数目
  • 3.6. 转CryIAc基因部分植株的RT-PCR检测分析
  • 3.7. 转基因甘蓝植株离体叶片抗虫试验
  • 3.7.1. 小菜蛾取食转基因叶片中毒后不同阶段的症状
  • 3.7.2. 小菜蛾不同时间取食甘蓝叶片的情况观察
  • 3.7.3. 小菜蛾幼虫校正死亡率和平均单虫重
  • 4. 讨论
  • 4.1. 转化材料的选择
  • 4.2. 提高发芽率不整齐的带菌种子的利用率
  • 3在组培苗中的作用'>4.3. AgNO3在组培苗中的作用
  • 4.4. 合适浓度的乙酰丁香酮能促进外植体转化
  • 4.5. 转基因植株的筛选
  • 4.5.1. 前人对转基因植株筛选的观点
  • 4.5.2. 本实验中对转基因植株的改良筛选法
  • 4.5.3. 转基因植株改良筛选法的结果
  • 4.6. Southern blot结果分析
  • 参考文献
  • 致谢

    • 相关论文文献

    • [1].300MW循环流化床锅炉频繁BT的分析优化[J]. 科技风 2020(08)
    • [2].基于BT模式下地铁项目成本管理的处理策略[J]. 居业 2020(01)
    • [3].某大学新校区建设BT模式的合同管理研究[J]. 山西建筑 2020(06)
    • [4].改性类BT树脂在覆铜板中的应用[J]. 覆铜板资讯 2020(02)
    • [5].BT建设模式下设计管理实践与探索[J]. 中外建筑 2020(07)
    • [6].转Bt基因棉田棉铃虫对气候变暖与集约化种植的不对称响应[J]. 植物保护学报 2020(04)
    • [7].昆虫病原线虫与Bt联用对黏虫的防治效果[J]. 植物保护 2019(06)
    • [8].连续种植Bt玉米对土壤Bt蛋白含量及微生物数量的影响[J]. 生态环境学报 2016(12)
    • [9].论加强BT项目建设工程造价管理的建议[J]. 低碳世界 2017(10)
    • [10].以城市轨道交通为例研究项目治理下的BT模式选择[J]. 工程建设与设计 2017(08)
    • [11].民事合同和行政合同辨析——BT合同法律性质争议[J]. 法制博览 2017(11)
    • [12].有效防治甜菜夜蛾的Bt毒素种类及其应用前景[J]. 中国棉花 2017(06)
    • [13].造价咨询单位在BT项目中的造价管理[J]. 居业 2017(07)
    • [14].BT项目如何处理与预防不平衡报价[J]. 低碳世界 2017(28)
    • [15].不同浓度苏云金杆菌(Bt)悬浮剂防治美国白蛾室内药效[J]. 安徽农业科学 2017(25)
    • [16].BT模式在我国新型城镇化建设中的运用研究——以湖北省S市“三化”工程为例[J]. 工程经济 2017(09)
    • [17].浅谈BT模式在城市轨道交通建设中的应用[J]. 中外企业家 2016(23)
    • [18].BT型杂交粳稻育种研究的进展与技术策略[J]. 中国种业 2015(01)
    • [19].基于BT融资模式下高速公路建设项目风险控制分析[J]. 北方交通 2015(06)
    • [20].管理会计与BT模式下项目公司的薪酬设计[J]. 商 2015(34)
    • [21].农作物害虫对Bt蛋白抗性的研究进展[J]. 华中昆虫研究 2016(00)
    • [22].浅论BT模式的发展与建筑企业的选择[J]. 现代商业 2013(34)
    • [23].关于BT模式下城市轨道交通工程站后专业施工组织的探讨[J]. 隧道建设 2015(S1)
    • [24].北方春玉米区亚洲玉米螟对Bt玉米的抗性风险分析[J]. 植物保护学报 2019(06)
    • [25].棉铃虫对转Bt基因棉花的行为反应[J]. 环境昆虫学报 2017(01)
    • [26].苏州中环快速路BT项目安全管理经验[J]. 市政技术 2016(S2)
    • [27].凹凸棒石对Bt蛋白的吸附特性及其对生物活性的影响[J]. 矿物学报 2017(Z1)
    • [28].阳离子对Bt蛋白在矿物表面吸附动力学的影响[J]. 农业环境科学学报 2017(09)
    • [29].涝渍对Bt棉棉蕾杀虫蛋白表达含量及氮代谢影响[J]. 作物学报 2017(11)
    • [30].市政基础设施建设的BT模式管理路径研究[J]. 中国管理信息化 2015(24)

    标签：;  ;  ;  ;  

    转Bt基因甘蓝的抗虫性研究
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕速过 版权所有 鄂ICP备12018319号-5