不同氧浓度对人早孕绒毛细胞滋养层细胞血管内皮生长因子及其可溶性受体表达的影响

论文摘要

目的:探讨原代培养的人早孕绒毛细胞滋养层细胞（CTs）在不同氧浓度下经过不同时间培养后,细胞上清液中血管内皮生长因子（VEGF）和可溶性血管内皮生长因子受体—1（sFlt-1）的表达情况。方法:无菌条件下获取正常妊娠6～8周早孕绒毛组织,经胰蛋白酶/DNA酶Ⅰ联合消化,Percoll密度梯度离心法对得到的细胞进行纯化,将最终获得的CTs应用免疫细胞化学法对其纯度加以鉴定,并同时进行原代培养。将原代培养的CTs分为4组:（1）正常氧浓度组（20%O2）;（2）低氧1组（8%O2）;（3）低氧2组（2%O2）;（4）低氧复氧组（2%O2/20%O2）。分别在正常氧浓度组、低氧1组、低氧2组CTs培养72h、96h、120h、144h后,低氧复氧组CTs低氧培养72h（2%O2培养72h）、复氧24h（总计培养时间96h）、复氧48h（总计培养时间120h）、复氧72h（总计培养时间144h）后,经过台盼蓝排出试验观察CTs的活力、计算细胞存活率并采用competitive ELISA法检测细胞上清液中VEGF和sFlt-1蛋白的表达情况。结果:CTs在不同氧浓度下经过不同时间培养后细胞上清液中VEGF及sFlt-1的浓度表达情况:（1）正常氧浓度组、低氧1组、低氧2组的CTs分别培养72h、96h、120h、144h后细胞上清液中VEGF的浓度分别为:正常氧浓度组223±32 pg/mL,271±33 pg/mL,313±41 pg/mL,361±49 pg/mL;低氧1组347±75 pg/mL,427±65 pg/mL,491±48 pg/mL,544±72 pg/mL;低氧2组382±50 pg/mL,442±49 pg/mL,503±42 pg/mL,556±70 pg/mL。可见正常氧浓度组、低氧1组、低氧2组的CTs细胞上清液中VEGF的浓度随着培养时间的延长均呈增高趋势;低氧1组、低氧2组的CTs细胞上清液中VEGF的浓度于各时间点均明显高于正常氧浓度组（P值均＜0.01）;低氧1组与低氧2组各时间点VEGF的浓度相比较均无显著差异（P值均＞0.05）。（2）正常氧浓度组、低氧1组、低氧2组的CTs分别培养72h、96h、120h、144h后细胞上清液中sFlt-1的浓度分别为:正常氧浓度904±231 pg/mL,1339±321pg/mL,2013±452 pg/mL,2541±577 pg/mL;低氧1组1929±489 pg/mL,2543±785 pg/mL,3365±1004 pg/mL,3861±1151 pg/mL;低氧2组2008±466pg/mL,2687±675 pg/mL,3488±948 pg/mL,4017±1105 pg/mL。可见正常氧浓度组、低氧1组、低氧2组的CTs细胞上清液中sFlt-1的浓度随着培养时间的延长均呈增高趋势;低氧1组、低氧2组的CTs细胞上清液中sFlt-1的浓度于各时间点均明显高于正常氧浓度组（P值均＜0.01）;并且低氧1组与低氧2组各时间点sFlt-1的浓度相比较均无显著差异（P值均＞0.05）。（3）低氧复氧组的CTs低氧培养72h后,细胞上清液中VEGF、sFlt-1的浓度（401±55 pg/mL,2282±419 pg/mL）分别明显高于正常氧浓度组（P值均＜0.01）,而与低氧1组和低氧2组相比差别不明显（P值均＞0.05）。（4）低氧复氧组的CTs复氧24h后,细胞上清液中VEGF的浓度（362±50 pg/mL）高于正常氧浓度组,但与低氧1组和低氧2组相比是降低的,两者均有统计学意义（P值均＜0.01）;细胞上清液中sFlt-1的浓度（2086±431 pg/mL）高于正常氧浓度组（P值＜0.01）,而与低氧1组和低氧2组相比降低不明显（P值＞0.05）。（5）低氧复氧组的CTs分别复氧48h、72h后,细胞上清液中VEGF、sFlt-1的浓度（350±57 pg/mL,1932±448 pg/mL;321±35 pg/mL,1831±441 pg/mL）与低氧1组和低氧2组相比较均有明显降低（P值均＜0.01）,且48h内持续保持此状态,而与正常氧浓度组相比较差别不明显（P值均＞0.05）。结论:人早孕绒毛组织中的CTs在低氧条件下VEGF、sFlt-1的分泌是持续性增加的,并且在2%O2和8%O2低氧浓度下无明显区别。CTs在低氧条件下培养72h再分别经过复氧48h、72h后,VEGF、sFlt-1的浓度表达均恢复到正常氧浓度下水平,且48h内与正常氧浓度条件下培养的CTs保持一致。意义:CTs中VEGF、sFlt-1在不同氧浓度条件下的反应有助于进一步理解胎盘血管重铸机制。低氧条件下sFlt-1的增高,竞争性的结合循环中游离的VEGF,拮抗VEGF血管生成作用,有助于理解子痫前期的发生机制。高水平的sFlt-1可能能够预测子痫前期的发生,因此可以早期采取预防措施,降低子痫前期的发病率。

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