论文摘要
现代药理研究表明,龙胆总苷（total glucosides from Radix gentianae,TGG）是中药龙胆的主要活性部位,具有保肝利胆、抗炎抗菌多方面的生理活性,对于急慢性肝病的治疗具有确切的疗效,但迄今尚未有龙胆总苷有效部位的制剂被批准上市。因此,本课题拟从龙胆中分离纯化具保肝、护肝作用的有效部位龙胆总苷（总裂环环烯醚萜苷类化合物）,进行其中间体及注射用冻干粉针剂的制备工艺、质量标准、稳定性和药动学的研究,为新药的研制和申报奠定基础。本研究主要包括以下六部分内容:1、龙胆药材资源调查和质量标准研究（1）比较了21批不同产地和采收季节龙胆药材的质量,确定主要产地和药材来源。（2）通过多批药材的研究,建立了龙胆药材的质量标准,主要包括药材性状、鉴别、含量测定（有效部位TGG的含量测定及主要有效成分龙胆苦苷、獐牙菜苷、獐牙菜苦苷的含量测定）和RP-HPLC指纹图谱。除四川成都、河南商丘等个别产地的药材以外,其他产地龙胆药材的指纹图谱相似度良好。指纹图谱相似度分析结果与主要成分定量分析所归纳结果基本一致。2、龙胆总苷提取纯化工艺的研究（1）优化龙胆药材提取工艺。比较了5种常见提取方式,采用加热回流提取法。通过单因素考察及正交试验设计,对影响龙胆提取工艺的因素进行了优化。确定龙胆最佳提取工艺为:龙胆药材用70%乙醇提取三次,每次1h,溶剂用量分别为10倍、8倍、8倍。（2）大孔吸附树脂法分离纯化龙胆总苷。以龙胆苦苷的吸附量、解吸率和产物中龙胆苦苷的百分含量为考察指标,筛选树脂。以产物中龙胆苦苷的转移率和百分含量为指标,通过单因素考察结合星点设计-效应面法对最佳树脂HPD300的纯化工艺进行了优化。10批TGG中间体指纹图谱相似度在0.986-0.998之间,说明不同批次龙胆总苷中间体的质量具有良好的一致性,提取纯化工艺稳定。3、龙胆总苷中间体的稳定性研究（1）龙胆苦苷在体外生物样品中的稳定性研究。进行了龙胆苦苷在不同生理pH及大鼠生物样品中的稳定性研究,结果显示,龙胆苦苷在胃内容物、胃黏膜、小肠内容物、肠黏膜和肝组织匀浆中的降解过程类似于其在各自不同pH缓冲液中的降解过程,提示这些部位的药物代谢酶对龙胆苦苷没有降解作用。（2）龙胆苦苷水溶液的降解动力学研究。考察了温度、pH、缓冲盐种类、离子强度、光照等对龙胆苦苷水溶液稳定性的影响,以确定其最适保存条件。4、龙胆总苷粉针剂的成型工艺及配伍稳定性研究由于龙胆总苷性质不稳定、在胃肠道中容易被破坏、口服生物利用度低,所以将龙胆总苷有效部位制成冻干粉针剂。以外观、色泽及复溶性为指标对龙胆总苷粉针剂的处方进行了优化,并通过绘制冻干曲线确定了最佳冷冻干燥工艺。为方便临床合理用药,对注射用龙胆总苷与输液配伍的稳定性进行了研究。结果显示,龙胆总苷注射液与5种常见输液（5%葡萄糖、10%葡萄糖、5%葡萄糖氯化钠、0.9%氯化钠及复方氯化钠注射液）配伍使用后,8 h内各配伍液的外观、pH、有效成分含量均无明显变化。5、龙胆总苷粉针剂质量标准和稳定性的研究对3批龙胆总苷粉针剂样品进行了性状、鉴别（TLC及HPLC鉴别）、检查（装量差异、pH、水分、可见异物、澄明度、鞣质、树脂、草酸盐、蛋白质、炽灼残渣、钾离子、重金属、砷盐、指纹图谱）、含量测定（龙胆总苷及龙胆苦苷、獐牙菜苷、獐牙菜苦苷等3种裂环环烯醚萜苷）等研究,建立了龙胆总苷粉针剂的质量标准。对3批样品进行影响因素试验和加速稳定性试验,以样品性状、鉴别、水分、pH、含量及指纹图谱等为指标。考察样品的稳定性,以确定制剂的贮存条件、包装材料及有效期。6、龙胆总苷注射液的药动学研究建立Beagle犬血浆中龙胆苦苷HPLC测定方法,研究龙胆苦苷口服及静注给药后在Beagle犬体内的药代动力学及口服给药的绝对生物利用度。结果表明:龙胆苦苷静注给药后在Beagle犬体内的药代动力学符合二室模型,t1/2α和t1/2β分别为（0.1212±0.0900）h和（1.11±0.12）h,Vd与CL分别为（4.06±0.92）L和（2.59±0.53）L·h-1;口服给药后,龙胆苦苷在Beagle犬体内的绝对生物利用度仅为（4.20±1.34）%。龙胆苦苷在Beagle体内吸收、分布、消除较快,口服给药生物利用度低。
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