论文摘要
研究目的：系统研究四君子汤的抗诱变作用及量效关系，探讨四君子汤的抗诱变作用机理，确认四君子汤对遗传物质的保护作用，为临床上应用四君子汤拮抗环磷酰胺等常用化疗药物的诱变性提供实验依据。研究方法：采用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠染色体畸变实验和人外周血淋巴细胞微核试验等3个测试系统，以临床常用的化疗药物环磷酰胺（CPP）、氟尿嘧啶（5-FU）和三氧化二砷（As2O3）为诱变剂（阳性对照物），研究四君子汤的抗诱变性能。每个实验中，设1个空白对照组、1个阳性对照组、四君子汤高剂量与相应诱变剂合用组（以下简称四君子汤高剂量组）、四君子汤中剂量与相应诱变剂合用组（以下简称四君子汤中剂量组）、四君子汤低剂量与相应诱变剂合用组（以下简称四君子汤低剂量组）。小鼠微核试验和染色体畸变实验各组动物分别用生理盐水或四君子汤连续灌胃7天后，腹腔注射诱变剂，处死前4小时各组动物均腹腔注射秋水仙素液。微核标本用直接涂片法制片，染色体标本用滴片法制片。人外周血淋巴细胞微核试验在无菌操作培养人外周血24小时后，四君子汤各剂量组加入诱变剂以及不同剂量的四君子汤含药血清，空白组加入等量无菌生理盐水，阳性对照组加入相应诱变剂及无菌生理盐水，培养终止前4小时每个标本均加入秋水仙素液。培养72小时后收获细胞，采用气干法制片。所有玻片标本经Giemsa染色后，双盲法阅片，在油镜下观察、计数，并显微照相记录典型标本。两组间均数比较用t检验，各剂量组间用方差分析，同组的微核率与染色体畸变率进行直线相关性分析。研究结果1小鼠骨髓细胞微核试验：与空白组比较，三种阳性药物组（CPP、5-FU、As2O3）小鼠的微核率明显升高（p＜0.01），说明这3种化疗药物对遗传物质均有明显的诱变作用。在四君子汤拮抗CPP诱发微核实验中：与阳性组比较，四君子汤中、高剂量组小鼠的微核率有极显著差异（p＜0.01）；在四君子汤拮抗5-FU诱发微核实验中：与阳性组比较，四君子汤低、中剂量组小鼠的微核率有显著性差异（p＜0.05），四君子汤高剂量组有极显著差异（p＜0.01）；在四君子汤拮抗As2O3诱发微核实验中：与阳性组比较，四君子汤低、高剂量组小鼠的微核率有显著性差异（p＜0.05），四君子汤中剂量组有极显著差异（p＜0.01）。经方差分析，在四君子汤抗CPP和5-FU诱变实验中，四君子汤低剂量与高剂量、中剂量与高剂量有显著性差异（p＜0.05），而低剂量与中剂量无显著差异，未表现出明显量效关系；在四君子汤抗As2O3诱变实验中，四君子汤低剂量与中剂量有显著性差异（p＜0.05），而低剂量与高剂量、中剂量与高剂量无显著差异，未表现出明显量效关系。2小鼠骨髓细胞染色体畸变实验：与空白组比较，三种阳性药物组（CPP、5-FU、As2O3）小鼠染色体畸变率明显升高（p＜0.01），说明这3种化疗药物对遗传物质均有明显的诱变作用。在四君子汤拮抗CPP诱发染色体畸变实验中：与阳性组比较，四君子汤中、高剂量组染色体畸变率有显著差异（p＜0.05）；在四君子汤拮抗5-FU诱发染色体畸变实验中：与阳性组比较，四君子汤低、中剂量组染色体畸变率有显著性差异（p＜0.05），四君子汤高剂量组有更显著差异（p＜0.01）；在四君子汤拮抗As2O3诱发染色体畸变实验中：与阳性组比较，四君子汤低、高剂量组染色体畸变率有显著性差异（p＜0.05），四君子汤中剂量组有极显著差异（p＜0.01）。经方差分析，在四君子汤抗CPP、As2O3诱变实验中，四君子汤各剂量组间无显著差异，未表现出量效关系；在四君子汤抗5-FU诱变实验中，四君子汤低剂量与高剂量、中剂量与高剂量有显著性差异（p＜0.05），而低剂量与中剂量无显著差异，无明显量效关系。经直线相关分析，小鼠微核率与染色体畸变率存在显著正相关关系（r=0.9209，p＜0.01），说明微核的形成与染色体畸变、损伤有密切关系。3人体外周血淋巴细胞微核试验：与空白组比较，三种阳性药物组（CPP、5-FU、As2O3）的微核率明显升高（p＜0.01），说明这3种化疗药物对遗传物质均有明显的诱变作用。在四君子汤拮抗CPP诱发微核实验中：与阳性组比较，四君子汤中剂量组的微核率有显著差异（p＜0.05），而四君子汤高剂量组有更显著差异（p＜0.01）；在四君子汤拮抗5-FU、As2O3诱发微核实验中：与阳性组比较，四君子汤低剂量组的微核率有显著性差异（p＜0.05），中、高剂量组有更显著差异（p＜0.01）。经方差分析，在四君子汤抗CPP诱变实验中，四君子汤低剂量与高剂量、低剂量与中剂量间有显著性差异（p＜0.05），中剂量与高剂量间无显著差异，无明显量效关系；在四君子汤抗5-FU诱变实验中，四君子汤低剂量与高剂量、低剂量与中剂量、中剂量与高剂量比较，有显著性差异（p＜0.05），在统计学上表现出量效关系；在四君子汤抗As2O3诱变实验中，四君子汤低剂量与中剂量有显著性差异（p＜0.05），低剂量与高剂量、中剂量与高剂量间无显著差异，无明显量效关系。研究结论1．四君子汤具有显著拮抗环磷酰胺等三种常用化疗药物诱变性的作用，但未表现出明显的量效关系；2．四君子汤抗环磷酰胺等化疗药物诱变作用的可能机理是增强细胞在染色体水平上对遗传物质的保护作用以及提高细胞对染色体损伤的修复能力；3．四君子汤对人与小鼠的遗传物质具有一定的保护作用。