秦进芳（贵州省六盘水市疾病预防控制中心贵州六盘水５５３０００）
【中图分类号】Ｒ３７３【文献标识码】Ａ【文章编号】１５５０－１８６８（２０１４）１０
【摘要】艾滋病是由人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）感染引起的一种严重威胁人类身体健康的疾病。为有效遏止ＨＩＶ的蔓延，除寻求更加有效的疫苗和治疗药物外，ＨＩＶ早期诊断十分重要，其早期诊断主要靠实验诊断，包括病原学、免疫学、分子生物学等。
【关键词】人类免疫缺陷病毒聚合酶链反应抗原１９８１年美国发现世界首例艾滋病患者，１９８３年由美国人罗伯特加洛领导的研究小组成功分离出艾滋病毒（ＨＩＶ），引起全世界对其进行广泛深入的研究。
据联合国艾滋病规划署报道：截止２００４年底，估计全球有ＨＩＶ感染者３９４０万人（３５９０万～４４３０万）；２００４年，全球估计有４９０万（４３０万～６４０万）新感染者，３１０万（２８０万～３５０万）人死于艾滋病；而且每天有１４０００人新感染ＨＩＶ，给人类造成巨大的经济损失和社会危害。自１９８５年第一个艾滋病诊断试剂盒问世以来，ＨＩＶ检测技术发生了巨大的变化，下面就此领域的研究进展作一检述。
１抗原检测应用免疫荧光法、ＥＬＩＳＡ法及放射免疫直接测ＨＩＶ抗原，通常测Ｐ２４抗原，由Ｐ２４抗原出现于抗体出现之前，对窗口期感染的早期诊断有帮助意义，此法简便易行，还常用于细胞培养ＨＩＶ的测定，抗ＨＩＶ医药费物疗效的检测及ＨＩＶ感染者发展为艾滋病的动态观察。
２抗体检测ＨＩＶ抗体一般在感染４周后逐渐出现，可延至终身，是人类重要的检测指标，相比于近年来逐步发展起来的用免疫技术测定其感染因子，检测ＨＩＶ特异性抗体仍是诊断艾滋病的重要依据。
２．１ＨＩＶ抗体检测初筛实验２．１．１酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）ＥＬＩＳＡ法敏感性好且操作简便。目前酶免法测ＨＩＶ抗体试剂已发展到第四代，市售试剂有美国的雅培、上海科华、北京万泰等其敏感度几乎１００％，特异在９８．１％～９９．８％之间，并且适用于批量操作，缺点是有一定假阳性。
２．１．２凝集实验具有不需任何设备，一步即可迅速得到结果的优点，敏感性和特异性与ＥＬＩＳＡ相近。缺点是有假阳性，且价格昂贵，亦仅作初筛实验。
２．１．３在ＥＬＩＳＡ基础上发展起来的金免疫渗滤实验（ＧＩＦＡ），ＧＩＦＡ始于１９８５年，最初以酶作为标记物，１９８９年发展以胶体金为标记物用于检测艾滋病毒抗体的渗滤实验。１９９０年Ｏｓｋｉｏｗｉｃｚ等应用硒作为标记物建立了免疫层析实验。上述两种方法具有快速、简单，不需要任何仪器设备，几分钟可用肉眼观察结果的优点，目前在临床检测中已广泛应用。
２．２确证实验２．２．１免疫印迹实验（ＷＢ）ＷＢ是目前最特异、敏感的证实ＨＩＶ感染的方法，也是国内ＨＩＶ确认的首选方法。ＷＢ实验能检测到ｇｐ１２０、ｆｐ１６０、ｐ６６、ｐ５１、ｇｐ４１、ｐ３１、ｐ２４和１７Ｋｄａ等抗原相应的抗体。我国对于ＷＢ实验结果判断标准：ＨＩＶ阳性：至少有两条ｅｎｖ带和至少一条ｅｎｖ带和ｐ２４带同时出现。ＨＩＶ阴性：无任何ＨＩＶ抗体特异带出现。
ＨＩＶ可疑：出现ＨＩＶ抗体特异带，但带型不足以确认阳性者。ＷＢ实验操作较ＥＬＩＳＡ稍复杂，检测需在确证实验室进行。由于自身抗体的存在，该方法仍有假阳性。
２．２．２条带免疫印实验（ＬＴＡ）其原理和操作方法与ＷＢ实验基本相同，只有条膜来源和组成有所区别。
检测时信噪比高，本地清晰，无潜在假阳性干扰，克服了ＷＢ实验中使用病毒裂解产物而可能产生的同相载体上某些重要抗原不足缺点。这类试剂特异性高，但也有可能由于病毒株所合成抗原决定筛部位发生突变致ＨＩＶ抗体假阴性。
２．２．３放射免疫沉淀实验本法是将感染的Ｈ９细胞和３５Ｓ蛋氨酸孵育，用去垢剂将细胞溶解，再用抗ＬｇＧＡ蛋白琼脂糖去除有反应性的人抗原，将上清液（含有病毒蛋白）与待测血清混合，如有ＨＩＶ抗体，则同位素标记的ＨＩＶ蛋白与之结合产生沉淀。沉淀物用含有Ｃｌｅｌａｎｄ试剂的缓冲液和十二烷基硫酸（ＳＤＳ）洗脱，即可将病毒抗原分离。然后病毒蛋白用放射自显影鉴定，并同时用已知的分子标记物比较。该方法敏感性和特异性比ＷＢ方法还高，但费时多，技术难度大。
３核酸检测３．１原位杂交（ｉｎｓｉｔｅｈｙｒｉｚａｔｉｏｎ）指应用特定的标记探针以分子杂交法直接检测标本中的ＨＩＶ病毒靶核酸，最初为放射性标记，后来逐渐发展为酶标记或化学发光试剂标记。阳性率较ＰＣＲ稍低，随着核酸扩增技术的出现，基因探针技术也失去了其应用价值。
３．２聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术的一种以核酸生物学为基础的分子生物学诊断技术自１９８５年问世来，已成为生物医学领域最有价值的研究手段之一。运用ＰＣＰ技术对于阐明ＨＩＶ的发病机制有极大价值，特别适用于新生儿感染的诊断。目前有两种方法用于ＨＩＶ感染的检查：ＰＣＲＤＮＡ用于扩增前病毒ＤＮＡ以诊断ＨＩＶ感染，ＰＣＲＲＮＡ：用逆转录ＰＣＲ（ＰＴＰＣＲ）法可检出血浆中ＨＩＶ基因组的存在。定量ＰＣＲ检测病毒载量主要有三种方法：ｂＤＮＡ、ＲＴＰＣＲ及ＮＡＳＢＡ。
ｂＤＮＡ是一种核酸检测技术。它属于信号扩增：而ＲＴＰＣＲ及ＮＡＳＢＡ检测属于靶扩增。ｂＤＮＡ检测中靶探针是与ＨＩＶ基因组中的ｐｏｌ基因序列特异结合，此段序所有已知的ＨＩＶ基因组中最保守的区域。ＰＴＰＣＡ、ＮＡＳＢＡ属于ＰＣＡ方法，其中包括抽提ＲＮＡ的步骤，所以比较受污染而使ＲＮＡ降解的ｂＤＮＡ与ＲＴＰＣＲ、ＮＡＳＢＡ有较好的稳定性、线性和可重复性。
３．３基困芯片应用于ＨＩＶ检测得到迅速发展人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）ＰＲＴ４４０也广泛用于ＨＩＶＩ病毒的测序、分型及多态性分析。但由于该技术较为复杂，且成本高，目前对其应用仍大多停留在实验阶段，离临床检验及疾病诊断的普及性还有一段距离。综上所述各种实验方法可以根据ＨＩＶ感染的不同时期与状态选择不同的检测手段。ＨＩＶ原发感染２周内，任何方法均无法检测到病毒，２周后出现病毒血症时，可检测病毒抗原，感染６周～８周后可以选择检测抗体的方法。运用ＰＣＲ技术可用来追踪ＨＩＶ的自然感染史；可用来监测长期潜伏期（４ａ～７ａ）患者；以及在抗病毒治疗期间的病毒载量水平；也可用于ＨＩＶＩ血清阳性母亲的婴儿的ＨＩＶ检测。在婴儿出生后最初６个月～９个月期间。他们的血清中存在母体的抗体，因此用ＰＣＲ可判定婴儿是否真正被ＨＩＶ感染。就目前而言，标准的检测方法是血清学ＨＩＶ抗体检测，它是诊断艾滋病感染者和艾滋病的主要指标和标准检测项目，分子生物芯片等更新检测技术可能会广泛应用于ＨＩＶ检测我们应密切注视检测技术的发展，以更准确、快速的方法对ＨＩＶ感染作出诊断。
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