论文题目: 真菌Cordyceps sinensis药理活性蛋白及CSDNase的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 生物化学与分子生物学
作者: 叶茂青
导师: 邹国林
关键词: 真菌,菌丝体培养,药理活性蛋白,酸性,大分子相互作用,共振镜生物传感器,蛋白折叠
文献来源: 武汉大学
发表年度: 2005
论文摘要: 真菌Cordyceps sinensis中文名为冬虫夏草菌,分类学上属于麦角菌科（Clavicipitaceae）,虫草属（Cordyceps（Fr.）Link）。C.sinensis是一种生长在特殊的环境中,具有独特生活史的药用真菌。C.sinensis寄生在蝙蝠蛾科昆虫的幼虫体内与其它一些真菌形成的复合体为我国民间较常用的名贵中药,称为冬虫夏草,别名虫草、冬虫草。冬虫夏草对生长条件要求极严而其生长环境特殊,现在尚无法大规模人工培养,而天然的冬虫夏草目前远远不能满足医疗市场的需要。C.sinensis菌丝体的成分与天然冬虫夏草的组成成分有一定的相似,初步研究表明其具有增强免疫,抗肿瘤和抗菌的活性。因此人工液体培养的C.sinensis菌是一个公认的非常有前途的中药冬虫夏草的代用品。 采用正交实验法,选择使用大豆粉和玉米粉作为C.sinensis菌丝体液体培养的主要原料,研究了C.sinensis的大规模液体培养的条件,以期为对C.sinensis蛋白药理活性的研究和C.sinensis菌丝体的大规模生产打下基础。正交实验结果表明,在使用大豆粉和玉米粉为主要培养原料时,C.sinensis的最佳培养基主要成分的配比为:大豆粉2%,玉米粉4%,蔗糖4%,KH2PO40.05%,维生素B13mg/L。在此最佳配比条件下,培养基的起始pH值应为6.0左右的弱酸性环境,在培养过程中应充分满足培养时菌丝体的耗氧量,培养菌丝体的时间在4-5d为宜。 使用生化技术从C.sinensis菌丝体中提取了C.sinensis粗蛋白（主要为可溶蛋白部分）,并将C.sinensis粗蛋白分离成了5个组分（CS1、CS2、CS3、CS4、CS5）。建立了对蛋白样品的数个药理活性的检测方法(凝集素活性、抗肿瘤活性、核糖
论文目录:
中文摘要
英文摘要
第一章 绪论
1 真菌Cordyceps sinensis研究进展
1.1 真菌Cordyceps sinensis简介
1.2 冬虫夏草的成分分析
1.3 Cordyceps sinensis的成分分析
1.4 C.sinensis和冬虫夏草的药理功能
1.5 小结
2 药用真菌中药理活性蛋白质研究概况
2.1 凝集素
2.2 免疫调节蛋白
2.3 核糖体失活蛋白
2.4 核糖核酸酶
2.5 脱氧核糖核酸酶
2.6 蛋白酶和蛋白酶抑制剂
2.7 抗菌蛋白
2.8 其他类蛋白质
2.9 小结
3 DNase Ⅱ(酸性DNase)的研究进展
3.1 DNase Ⅱ的生物化学特性
3.2 DNase Ⅱ基因的鉴定和特性
3.3 DNase Ⅱ基因和相应酶的分析
3.4 DNase Ⅱ酶和DNA的降解
3.5 DNase Ⅱ酶和细胞死亡的关系
3.6 DNase Ⅱ生理功能的运行模式
3.7 DNase Ⅱ研究的临床意义
3.8 小结
4 DNase Ⅰ的研究进展
4.1 DNase Ⅰ的生物化学特性
4.2 DNase Ⅰ基因的鉴定和特性
4.3 DNase Ⅰ基因和相应酶的分析
4.4 DNase Ⅰ的研究在医学上的意义
4.5 小结
第二章 Cordyceps Sinensis液体培养的研究
1 材料与方法
1.1 菌株
1.2 实验方法
2 实验结果
2.1 正交实验对C.Sinensis培养条件的优化结果
2.2 C.Sinensis在最佳培养基中的生长周期
2.3 最佳培养基的起始pH对菌体得率的影响
2.4 耗氧量对菌体得率的影响
3 讨论
第三章 Cordyceps sinensis药理活性蛋白的研究
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 实验方法
2 实验结果与讨论
2.1 凝集素，RNase和蛋白酶抑制剂活性
2.2 抗肿瘤活性
2.3 蛋白酶活性
2.4 抗菌蛋白活性
2.5 DNase活性
3 小结
第四章 CSDNase的纯化及其蛋白性质的研究
第一节 真菌Cordyceps Sinensis菌丝体液体培养条件的改变
1 材料与方法
1.1 缓冲液的配制
1.2 方法
2 实验结果
2.1 C.sinensis菌丝体生长曲线
2.2 培养期间菌丝体可溶性蛋白与培养基蛋白含量的变化
2.3 培养期间培养基与菌丝体酸性DNase酶总活性的变化
3 讨论
第二节 Cordyceps Sinensis酸性DNase的纯化
1 材料与方法
1.1 缓冲液的配制
1.2 实验方法
2 实验结果
2.1 CSDNase的纯化
2.2 CSDNase纯度的鉴定
3 讨论
第三节 Cordyceps Sinensis酸性DNase蛋白性质的研究
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 实验方法
2 结果和讨论
第五章 CSDNase酶学性质的研究
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 实验方法
2 结果与讨论
2.1 CSDNase底物专一性
2.2 CSDNase对单双链和质粒(环状超螺旋)DNA切割速率的测定
2.3 CSDNase最适反应pH值和最适反应温度
2.4 金属离子对CSDNase活性的影响
2.5 CSDNase稳定pH值和稳定温度
2.6 CSDNase酶切DNA产物末端基团的确定
2.7 CSDNase对双链DNA的切割方式的研究
3 讨论
第六章 CSDNase与底物作用的动力学研究
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
1.2 实验方法
2 结果和讨论
2.1 DNase的结合量
2.2 数据分析
2.3 热力学分析
3 讨论
4 小结
第七章 牛血清IgG的热化学变性研究
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果与讨论
2.1 使用DSC对牛血清IgG热变性的研究
2.2 使用DSC对牛血清IgG热化学变性的研究
2.3 荧光光谱法研究牛血清IgG的等温化学变性
2.4 荧光光谱法研究牛血清IgG的热化学变性
3 小结
参考文献
附录：主要实验仪器与常规实验试剂
本研究工作的创新点
博士研究生在读期间发表的论文
致谢
发布时间: 2006-03-27
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