中药质量标准中中药配伍组合效应的影响 ——黄连解毒汤配伍组合效应研究

论文摘要

随着中药的普遍应用和国际化进程的不断发展,中药质量标准及其质量控制的重要性日益彰显。作为药品研究、生产和使用的国家标准《中华人民共和国药典·2005》亦成为人们的关注对象,不断有文献质疑药典中某些相关标准的合理性。作者在参阅文献、参考药典的过程中发现诸多含有黄连解毒汤典方基本组合黄连-黄芩组合和黄芩-黄柏组合的方剂中所规定的目标检测物黄芩苷、小檗碱的标示含量限量与中药有效成分的理论含量之间有巨大差异。如一清颗粒中的目标检测物黄芩苷的含量限量只相当于理论含量的9/1,清胃黄连丸中盐酸小檗碱的含量限量为理论含量的1/52,这势必会导致国家标准的质量控制失权,也为制假、销假提供了可乘之机。为了探索产生此现象的原因并力求找到解决的办法,本文以黄连解毒汤为研究平台,研究黄连解毒汤配伍组合效应对质量标准制定的影响。本课题研究内容包括:黄连解毒汤提取工艺筛选,黄连解毒汤配伍对化学成分含量的影响,黄连解毒汤配伍提取物在不同介质中的化学成分含量,黄连解毒汤指纹图谱的建立四部分。1、黄连解毒汤提取工艺筛选采用水煎醇沉工艺,L9（34）正交试验设计,反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定各样品溶液中栀子苷、黄芩苷和盐酸小檗碱的含量,考察提取时间、溶媒量、pH三个因素对黄连解毒汤中栀子苷、黄芩苷及盐酸小檗碱含量的影响并以此判断较好的提取工艺。结果表明:溶媒量为16倍,首次提取时间为30min,第二次提取时间为15min,溶媒pH为8的条件下提取效果为最好,在此条件下黄芩苷、盐酸小檗碱、栀子苷的含量分别为23.36mg/g,2.73mg/g,59.48mg/g。2、黄连解毒汤配伍对化学成分含量的影响采用L8（27）正交试验设计,以RP-HPLC法测定黄连解毒汤及其各分解组合方中的栀子苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的含量。结果发现,不同分解方剂中黄芩苷和盐酸小檗碱含量有很大差异,黄连和黄柏与黄芩配伍后盐酸小檗碱和黄芩苷的含量都大幅度降低,黄连单煎时盐酸小檗碱的含量为9.31mg/g,黄芩单煎时黄芩苷含量为48.06mg/g,黄连和黄芩合煎后黄芩苷的含量为21.52mg/g,盐酸小檗碱的含量为0.34mg/g,合煎后较合煎前黄芩苷的含量降低了二分之一,盐酸小檗碱含量降低至原来的三十分之一,栀子在该方中能够缓解这两种成分降低的幅度,在黄连黄芩组合中加入栀子共煎后黄芩苷的含量为32.88mg/g,盐酸小檗碱的含量为0.77mg/g,两者的含量较未加前都有了较大程度的提高,但较单煎液中有效成分含量有很大差距。试验发现含有黄连-黄芩组合和黄柏-黄芩组合的方剂提取液在放置过程中产生大量沉淀,经色谱分析,这些沉淀的成分主要是盐酸小檗碱和黄芩苷。由此可知,以黄连解毒汤中盐酸小檗碱或黄芩苷含量作为检测对象进行质量控制的方法不能够真实反映方剂的质量。《药典·2005》中很多方剂如一清颗粒、清胃黄连丸等方剂中都含有类似的配伍组合,使得这些方剂含量测定项中的黄芩苷和盐酸小檗碱的规定量远远低于实际含量。因此,以组方中某一有效成份含量限量为检测标准的质量控制模式无法达到质控目的,应该建立一种方法来代替现有的质控模式。3、黄连解毒汤配伍提取物在不同介质中化学成分含量采用随机单位组试验设计,将黄连解毒汤及其各分解组方的提取物在37℃的人工胃液、人工肠液、蒸馏水中分别感触处理1.5h,结果发现,人工胃液抑制黄连解毒汤中黄芩苷、盐酸小檗碱的溶出,感触后人工胃液中黄芩苷、盐酸小檗碱的含量分别为18.10mg/g,2.13mg/g,人工肠液促进黄连解毒汤中黄芩苷、盐酸小檗碱的溶出,感触后人工肠液中黄芩苷、盐酸小檗碱的含量分别为31.42mg/g,2.72mg/g。由此可知,黄连解毒汤该方适合于制成口服剂型。4、黄连解毒汤指纹图谱的建立用SPSS统计软件对17批黄连解毒汤提取液的高效液相色谱数据进行聚类分析,在同一类中选出10个样品进行色谱法统计,得到12个特征指纹峰,以黄芩苷色谱峰作为内参照峰,计算12特征峰的相对峰面积、相对保留时间和相似度,得到黄连解毒汤的数字化指纹图谱。试验结果表明本试验方法能够实现各色谱峰的分离,各单味药特征峰在复方图谱中都体现了出来,能够从多个角度反映黄连解毒汤质量,并且简便、重复性好,符合指纹图谱技术要求,可以作为黄连解毒汤质量控制方法。研究结果显示,黄连解毒汤及其各组合中因存在互作效应而使方剂中的有效成分含量难以准确地用高效液相色谱反映出来,因此单从该类组方中对有效成分的含量进行测定的质量管理或质量控制标准难以客观反映该药物的质量。为此,本文建立了黄连解毒汤指纹图谱,以模糊控制方式,能够更加有效地控制含有该类中药组合的制剂和方剂的质量。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 中药组合效应研究概况
• 1.2 中药质量标准的研究概况
• 1.3 黄连解毒汤及其质量标准研究概况
• 第二章 黄连解毒汤提取工艺研究
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.3 结果
• 2.4.讨论与小结
• 第三章 黄连解毒汤配伍对化学成分含量的影响
• 3.1 材料
• 3.2 方法
• 3.3.结果
• 3.4 讨论与小结
• 第四章 黄连解毒汤提取物在不同介质中的化学成分含量
• 4.1 材料
• 4.2 方法
• 4.3 结果
• 4.4 本章小结
• 第五章 黄连解毒汤指纹图谱的确定
• 5.1 材料
• 5.2 方法
• 5.3 结果
• 5.4 本章小结
• 第六章 全文总结
• 第七章 本课题创新点
• 参考文献
• 致谢
• 附录一 相关色谱图
• 附录二 有关对照品结构图
• 在学期间所发表的文章